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病毒转化细胞实验步骤

2021-6-17  阅读(415)

病毒转化细胞实验步骤如下:

1、血液制备: 柠檬酸 (Citric Acide)或 肝素 抗凝取血1~2ml,分装入管中,每管0.5ml全血,置于4℃冰箱中30分钟.

2、EBV病毒转化:从液氮中取出冻存的0.5ml全血,在37℃水中迅速解冻.

3、将解冻细胞与10ml不含血清的RPMI 1640混合,2500 rpm离心2分钟,弃上清,用含20%的胎牛血清、青、和的RPMI 1640生长培养基重悬细胞.

4、加入0.3~0.5ml的EBV病毒液,37℃水浴30分钟~2小时,并不时摇动,以免出现凝块.

5、分装入50ml的培养瓶中,同时补加适量培养液,置入含5%CO2温箱中,100%温度下培养.

6、一周后加补入2ml 培养基 .

7、经常镜检培养物,每3~4天加液或换液,随细胞数量增多,可分装入大瓶中培养. 



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