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上海博湖生物科技有限公司
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ELISA包被的方式论述
2025-3-24 阅读(159)
ELISA（酶联免疫吸附试验）中的包被是将抗原或抗体固定到固相载体表面的关键步骤，通常使用聚苯乙烯微孔板作为载体。包被的方式包括直接包被和间接包被两种：
直接包被：适用于天然蛋白和重组蛋白。将抗原或抗体溶液直接加入到微孔板中，通常在pH 9.0-9.6的碳酸盐缓冲液中，室温或4°C孵育过夜，以确保抗原或抗体充分吸附到载体表面。
间接包被：用于小分子抗原或不稳定抗原。通过将小分子抗原偶联到载体蛋白如牛血清白蛋白(BSA)或卵清蛋白(OVA)上，形成较大的复合物后再进行包被，或采用间接捕获法，先用特异性抗体包被，再通过抗原与抗体的结合实现固相化。
包被液的选择也很关键，常见的有pH 9.6的碳酸盐缓冲液和接近生理pH值的磷酸盐缓冲液。包被的温度一般在室温(18-25°C)或4°C进行，有时也可在37°C孵育2小时以加速反应。包被浓度通常为10ug/ml-20ug/ml，具体需根据载体和包被物的性质调整。包被完成后，为了封闭非特异性位点，防止后续步骤中的干扰，通常会使用牛血清白蛋白(BSA)、脱脂奶粉等封闭剂进行封闭处理。封闭剂的选择应根据实验的具体需求和背景噪声来确定。
