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上海博湖生物科技有限公司
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人血管生成素1elisa试剂盒操作步骤和注意事项
2018-12-20 阅读(269)
| 提 供 商 | 上海博湖生物科技有限公司 | 资料大小 | 16.5KB |
|---|---|---|---|
| 资料图片 | 【点击查看】 | 下载次数 | 11次 |
| 资料类型 | WORD 文档 | 浏览次数 | 269次 |
人血管生成素1elisa试剂盒 操作步骤
1.加样：分别设标准孔、待测样品孔、空白孔。设标准孔 7 孔，依次加入 100μL 不同浓度的标准品 （见试剂准备 2）。空白孔加 100μL（见试剂准备第二步*后一管），余孔加待测样品 100μL，酶标板加上覆膜，37℃ 温育 2 小时。
2.弃去液体，甩干，不用洗涤。
3.每孔加检测溶液 A 工作液 100μL（临用前配制），酶标板加上覆膜，37℃ 温育 1 小时。
4.弃去孔内液体，每孔用 300μL 的洗涤液洗涤，浸泡 1-2 分钟，吸去 （不可触及板壁） 或甩掉酶标板内的液体，在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几次 （也可轻拍将孔内液体拍干），重复洗板 3 次。*后一次洗涤后，要把孔内的洗涤液*甩干。自动洗板机亦可。
5.每孔加检测溶液 B 工作液 （临用前配制）100μL，加上覆膜，37℃ 温育 1 小时。
6.弃去孔内液体，甩干，洗板 5 次，方法同步骤 4。
7.每孔加底物溶液 90μL，酶标板加上覆膜，37℃ 避光显色 （反应时间控制在 15-25 分钟，不要超过 30 分钟。当标准孔的前 3-4 孔有明显的梯度蓝色，后 3-4 孔梯度不明显时，即可终止）。
8.每孔加终止溶液 50μL，终止反应，此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物溶液的加入顺序相同。如出现颜色不匀一，请轻轻晃动酶标板以使溶液混合均匀。
9.在确保酶标板底无水滴及孔内无气泡后，立即用酶标仪在 450nm 波长测量各孔的光密度 （O.D. 值）。
人血管生成素1elisa试剂盒 注意事项：
1.试剂准备：准备一次实验所需要的酶标条，其它的可从微孔板上拆下，密封，按照说明书要求保存，以备下次使用。
2.加样：实验操作中请使用一次性的吸头，避免交叉污染。加样时注意不要有气泡，将样品加于酶标板底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。加样或加试剂时，个孔与*后一个孔加样之间的时间间隔如果太大，将会导致不同的「预温育」时间，从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。因此，一次加样时间 （包括标准品及所有样品） 控制在 10 分钟内。设置复孔进行实验。
3.温育：为防止样品蒸发，实验时请将加上盖或覆膜的酶标板置于湿盒内，以避免液体蒸发，洗板后应尽快进行下步操作，任何时侯都应避免酶标板处于干燥状态，同时应严格遵守给定的温育时间和温度。
4.洗涤：充分的洗涤非常重要，在每次洗涤过程中，都要将洗涤液*甩干。洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在滤纸上拍干，勿将滤纸直接放入反应孔中吸水，同时要消除板底残留的液体和手指印，避免影响*后的酶标仪读数。如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实 验过程中。
5.反应时间的控制：加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化 （比如，每隔 10 分钟观察一次），如颜色较深，请提前加入终止液终止反应，避免反应过强从而影响酶标仪光密度读数。
6.底物：底物请避光保存，在储存和温育时避免强光直接照射。
7.如果实验室内湿度低于 60%，使用加湿器提高湿度水平。
