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DNS试剂(GB 20287)参考国家标准GB 20287-2006
2022-4-21 阅读(1487)
DNS试剂(GB 20287)参考国家标准GB 20287-2006
植物体内的碳素营养状况以及农产品的品质形状,常以糖含量作为重要指标。单糖和某些寡糖(如麦芽糖)含有游离的醛基或酮基,具有还原性,属于还原糖;多糖和蔗糖等属于非还原糖。可以利用多糖能被酸水解为单糖的特性通过测定水解后的单糖含量对总糖进行测定。
检测原理是用羧甲基纤维素钠盐(CMC)为底物，经纤维素酶水解后生成还原糖，后者能与反应，其中硝基还原成氨基，使溶液变为橙色，橙色的深度与还原糖的浓度成正比。因此可用比色法求得还原糖的含量，进而求出纤维素酶活的大小。
称取3，5-二硝基水杨酸3.15 g(化学纯)，加水500 mL。，搅拌5 s，水浴至45 ℃。然后逐步加入100 mL 0.2g/ mL的氢氧化钠溶液，同时不断搅拌。直到溶液清澈透明(注意：在加入氢氧化钠过程中，溶液温度不要超过48℃)。再逐步加入四水酒石酸钾钠91.0 g、苯2.50 g和无水亚硫酸钠2.50 g。继续45 ℃水浴加热，同时补加水300 mL，不断搅拌，直到加入的物质*溶解。停止加热，冷却至室温后，用水定容至1000 mL。用烧结玻璃过滤器过滤。取滤液，储存在棕色瓶中，避光保存。室温下存放7 d后可以使用，有效期为12个月。
制作标准曲线 取9支大试管，分别按表一顺序加入各种试剂。 表一 将上述各管溶液混后，在紫外可见分光光度计上用绿色滤光片(520nm) 进行比色测定，用空白管溶液调零，记录光密度值。以光密度值为横坐标，以葡萄糖浓度为纵坐标，绘制标准曲线。
DNS试剂用途：
1.在生化试验中，DNS常用于还原糖含量的测定。
2.也可用于生物质中半纤维素含量的测定。它们均要与标准葡萄糖曲线进行比对。
