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X-α-gal用作酵母双杂交系统中蓝白筛选的筛选标记
2022-6-15 阅读(3573)
X-α-gal用作酵母双杂交系统中蓝白筛选的筛选标记
X-α-gal是酵母半乳糖苷酶（MEL1）的显色底物，MEL1是GAL4酵母双杂交系统的一个报告基因，该基因受GAL4调控。MEL1编码的分泌型的α-半乳糖苷酶可水解无色的X-α-gal，形成蓝色产物。MEL1基因激活后，X-α-gal检测阳性克隆表达的α-半乳糖苷酶，阳性克隆直接在含有X-α-gal的固体培养基上呈蓝色。因此无需裂解细胞，费时费力的检测β-半乳糖苷酶报告基因，只需通过蓝白颜色筛选，即可快速和简便地识别阳性克隆。X-α-Gal的用途：1. 用于筛选含X-α-半乳糖苷酶基因的阳性酵母或细菌菌株。在固体培养基上直接检测酵母双杂交相互作用。2. 用于区分肠杆菌科内的不同菌种，以及区分双歧杆菌和乳酸菌3. 在组织化学中用于酶活性的检测。X-Gal与X-α-gal不同：X-Gal是E.coli β-半乳糖苷酶（LacZ）的反应底物，而X-α-gal是酵母α-半乳糖苷酶（MEL1）的反应底物。X-α-gal用作酵母双杂交系统中蓝白筛选的筛选标记。
携带MEL1基因的酵母菌株：Y2HGold、Y190、AH190、Y187、PG69-2A
操作说明
一、涂布于预制平板：
1）溶解24 mg X-α-gal于6 mL DMF，终浓度为4 mg/ mL。
2）涂布200 μL(15 cm) 或者100 μL（10 cm）X-α-gal 储存液于预制平板上；
3）置于37℃培养箱至液体被吸收（由于DMF挥发性低，最长可放4小时）；
4）将转化细菌或酵母涂于平板上，于37℃或30℃培养直至蓝色菌落出现。
二、直接加入琼脂中：
1）溶解60 mg X-α-gal于3 mL DMF，终浓度为20 mg/ mL。
2）将已灭菌琼脂培养基冷却至50-55℃；
3）向上述培养基中加入20 mg/ mL X-α-Gal，比例为每升培养基中加入1 mL X-α-Gal溶液。
