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中性粒细胞碱性磷酸酶染色液(NAP)采用原理
2022-11-4 阅读(2124)
中性粒细胞碱性磷酸酶染色液(NAP)采用原理
简介：
碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase，简称ALP或AKP)是一类于哺乳动物组织内广泛分布的磷酸酯酶，其活性在pH 9.2~9.8范围内最佳。它主要存在于附睾上皮之静纤毛、肠上皮和肾近曲小管的刷状缘、肝的毛细胆管膜、微动脉和毛细血管动脉部之内皮等物质交换活跃之处(细胞膜)，还可以出现在高尔基复合体、内质网、肠上皮之溶酶体、吞饮小泡、中性粒细胞之中性颗粒以及平滑肌之细胞膜。
中性粒细胞碱性磷酸酶染色液(NAP) 采用偶氮偶联法(又称同时偶联法)，而不是采用金属沉淀法来显示其碱性磷酸酶的活性，它作用原理是在pH9.2～9.8的碱性条件下，细胞内碱性磷酸酶可以通过水解AB-BI磷酸盐，从而释放出萘酚与磷酸，前者与偶联重氮盐可以生成有色产物，定位于细胞质中。该染液专门用于骨髓细胞或血液涂片的中性粒细胞的碱性磷酸酶染色, 碱性磷酸酶活性部位位于胞桨，呈蓝色，结果比金属盐沉淀法更可靠。
储存条件：
6个月有效。
自备材料：
1、 载玻片
2、 多聚甲醛（4%）
3、 显微镜
操作步骤(仅供参考)：
(一)、涂片
1、通过NAP固定液固定，制备新鲜血液或骨髓细胞涂片，充分水洗。
2、滴加准备好的NAP孵育液，孵育及水洗。
3、滴加甲基绿染色液或核固红染色液复染。水洗、晾干后镜检。
(二) 贴壁培养细胞
1、准备其他容器或6孔板培养的细胞，弃液，使用PBS清洗干净。
2、使用NAP固定液或多聚甲醛进行固定，PBS清洗。
3、滴加配制好的NAP孵育液，置于湿盒内，避光孵育，PBS清洗。
4、加入甲基绿染色液或核固红染色液复染。使用PBS清洗后镜检。
