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Taq DNA连接酶应用范围
2023-5-18 阅读(445)
Taq DNA连接酶应用范围
Taq DNA 连接酶是一种热稳定性连接酶，能够催化磷酸二酯键的形成，使与同一互补靶 DNA 链杂交的两条相邻寡核苷酸链的 5´-磷酸末端和 3´-羟基末端通过磷酸二酯键相连。Taq DNA 连接酶催化的连接反应只有当两条寡核苷酸链与互补靶 DNA 完全配对，并且两条寡核苷酸链之间没有空隙的条件下才可发生。因此，可以用它来检测单碱基替换。在 45℃-65℃ 范围内，Taq DNA 连接酶均有活性。
应用
双链DNA切刻的修复
用于Gibson组装方法的建立
活性定义
1 单位指 50μl 反应体系中，45℃ 条件下，15 分钟内能使 50% 的1μg 经 BstEII 消化的 λDNA 片段（12 bp 粘性末端）发生连接所需要的酶量。
储存
-20℃可保存半年，长期储存请置于 -70℃。
1× Taq DNA 连接酶反应缓冲液
20 mM Tris-HCl（pH 7.6），25 mM KAc，10 mM Mg(Ac)2，10 mM DTT，1 mM NAD 和 0.1% Triton X-100，45℃ 温育。 该酶需 NAD+ 作辅因子，在 10× Taq DNA 连接酶缓冲液中已添加 NAD+；为了延长 NAD+ 的半衰期，缓冲液应于 -70℃ 贮存。
合成酶，能催化两个分子连接成一个分子或把一个分子的尾相连接的酶。此反应与ATP的分解反应相偶联。在把两分子相连接的同时发生三磷酸腺苷（ATP)的高能磷酸键的断裂如DNA连接酶等。
连接酶是酶分类中重要的一类(EC 6):6.1形成C-O键；6.2形成C-S键；6.3形成C-N键；6.4 形成C-C键。
连接酶的催化反应过程需要Mg离子
