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南京亿迅生物科技有限公司
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免疫组化 IHC-P 实验方案分享
2024-7-4 阅读(529)
免疫组化 IHC-P 实验方案分享（仅供参考）
1.脱蜡和水化，时间由二甲ben新鲜程度和室温等综合决定
2.抗原修复，修复强度：高压修复>微波修复>胰-酶修复；修复液多种，EDTA>柠檬酸；85~95℃处理约15min，自然冷却至室温
3.细胞通透，TritonX-100, >10 um厚切片
4.灭活内源性过氧化物酶和生-物-素，3% H2O2 10~12min
5.血清封闭，小牛血清、BSA、羊血清, 不能与一抗来源一致
6.抗体孵育，浓度最重要，温度决定反应速度，时间决定反应量
7.--- 4℃过夜(16~24h)，次日37 ℃复温 30 min，反应温和，背景浅
8.--- 37 ℃ (1-2 h)，反应速度快，时间短
9.--- 室温，无法保证每次环境温度控制在一定范围，不建议
10.抗体稀释液(PBS, 专用的, PH7.4)
11.切片清洗(浸洗、冲洗和漂洗，普通5 min*3 ，抗体10min*4)
12.DAB显色，由显微镜下控制显色时间，决定背景的深浅和特异性染色的深浅
13.复染，目的是形成细胞轮廓，从而更好地对目标蛋白进行定位，胞浆蛋白适当时间长一点，核蛋白则要短。
14.长期保存，高倍镜观察，需脱水透化
15.封片，中性树胶等封片，避免产生气泡
16.免疫荧光注意避光，防止荧光衰减淬灭，防止自发荧光现象
