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上海沪宇实验室设备有限公司
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阅读：555发布时间：2011-11-4
人凋亡相关因子ELISA试剂盒的操作步骤
实验开始前，各试剂均应平衡至室温，试剂不能直接在37 溶解；试剂或样品配制时，均需充分混匀，混匀时尽量避免起泡。实验前应预测样品含量，如样品浓度过高时，应对样品进行稀释，以使稀释后的样品符合试剂盒的检测范围，计算时再乘以相应的稀释倍数。
1、加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100 ，余孔分别加标准品或待测样品100 ，注意不要有气泡，加样时将样品加于酶标板底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37 温育2 小时。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。
2、弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加检测溶液A 工作液100 （临用前配制），酶标板加上覆膜，37 温育1 小时。
3、弃去孔内液体，甩干，洗板3 次，每次浸泡1-2 分钟，大约400 /每孔，甩干（也可轻拍将孔内液体拍干）。
4、每孔加检测溶液B 工作液（临用前配制）100 ，加上覆膜，37 温育1 小时。
5、弃去孔内液体，甩干，洗板5 次，方法同步骤3。
6、每孔加底物溶液90 ，酶标板加上覆膜37 避光显色（反应时间控制在15-30 分钟，当标准孔的前3-4 孔有明显的梯度蓝色，后3-4 孔梯度不明显时，即可终止）。
7、每孔加终止溶液50 ，终止反应，此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。
8、立即用酶标仪在450nm 波长测量各孔的光密度（OD 值）。
注：
1、试剂准备：所有试剂在使用前应平衡至室温，使用后请立即按照说明书要求保存试剂。实验操作中请使用一次性的吸头，避免交叉污染。
2、加样：加样或加试剂时，*个孔与zui后一个孔加样之间的时间间隔如果太大，将会导致不同的“预温育”时间，从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。一次加样时间（包括标准品及所有样品）控制在10 分钟内。推荐设置复孔进行实验。
3、温育：为防止样品蒸发，实验时将加上盖或覆膜的酶标板置于湿盒内，以避免液体蒸发；洗板后应尽快进行下步操作，任何时侯都应避免酶标板处于干燥状态；同时应严格遵守给定的温育时间和温度。
4、洗涤：洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在滤纸上拍干，勿将滤纸直接放入反应孔中吸水，同时要消除板底残留的液体和手指印，避免影响zui后的酶标仪读数。
5、试剂配制：Detection A 及Detection B 在使用前请手甩几下或少时离心处理，以使管壁或瓶盖的液体沉积到管底。标准品、检测溶液A 工作液、检测溶液B 工作液请依据所需的量配制使用，并使用相应的稀释液配制，不能混淆。请配制标准品及工作液，尽量不要微量配制（如吸取检测溶液A 时，一次不要小于10 ），以避免由于不准确稀释而造成浓度误差；请勿重复使用已稀释过的标准品、检测溶液A 工作液、检测溶液B 工作液。
6、反应时间的控制：加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化（比如，每隔10 分钟），如颜色较深，请提前加入终止液终止反应，避免反应过强从而影响酶标仪光密度读数。
7、底物：底物请避光保存，在储存和温育时避免强光直接照射。
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