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上海沪宇实验室设备有限公司
阅读:409发布时间:2012-06-05
上海沪宇实验室设备有限公司
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实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠Ⅲ型胶原(Col Ⅲ)水平。用纯化的大鼠Ⅲ型胶原(Col Ⅲ)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入Ⅲ型胶原(Col Ⅲ),再与HRP标记的Ⅲ型胶原(Col Ⅲ)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过*洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的Ⅲ型胶原(Col Ⅲ)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中大鼠Ⅲ型胶原(Col Ⅲ)浓度。
1. 标准品的稀
2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品zui终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4. 配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
7. 温育:操作同3。
8. 洗涤:操作同5。
9. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.
10. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11. 测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
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