问题

可能原因

防止方法

（一）
显色淡
灵敏度偏低

1．试剂盒在运输途中时间太长，温度太高

试剂盒置保温箱内运输，并放足够数量的冰块，尽量缩短运输时间

2．试剂盒超过有效期

超过效期试剂盒不要使用

3．试剂、样品用前未能平衡

用前试剂、样品置室温平衡 30分钟左右

4．试剂开启时间过长长菌

试剂开启后请尽量在短时间内用完

5．移液器吸量不足，移液抽吸排放太快，吸头内壁挂液太多或内壁不清洁

校正移液器，吸头要配套，每次装吸头要吻合紧密。移液不宜过快，排放应*。吸头内壁要清洁，一次性使用。

6．恒温箱温度不足37℃或水浴锅水温度不足37℃）

放入反应板时注意培养箱温度，及时调整，孵育反应期间开启不宜太多，影响温度平衡。

7．孵育反应时间不足

定时钟准确定时

8．洗涤时冲击力太大，洗涤液浸泡时间太长，洗涤次数增加

减少洗涤冲击力，按说明书要求保留洗涤时间，准确记住洗涤次数

9．显色剂滴加量不足或顺序颠倒，或混合后加入

滴加显色液时，滴瓶垂直向下，持力均匀，滴速不宜过快，先加显色剂 A，反加显色剂B，不可将A、B液混合后加入

10．显色剂反应时间不足

准确定时

11．蒸馏水水质有问题

测定蒸馏水配制试剂对酶免疫法的影响

12．样品和NaN 3 防腐，抑制了酶的反应

样品不能加 NaN 3 防腐

（二）
重复性差

1．对于定量产品，没带标准品、质控品，采用以前的标准线

每次试验都必须带标准品、质控品

2．样品数量多少不一，加样时间有长有短

重复某一样品时，加样时间尽可能与*次接近

3．样本加入后未混匀

加样后在混匀器上充分混匀

4．移液器加样量不一致

尽可能使用同一移液器和装紧吸头移液时用力及抽吸速度一致

5．酶标仪滤光片不对或输入波长不对

TMB显色用450或450/630nm双波长

6．酶标仪测定重复性差

校准酶标仪

7．操作过程个别孔液体外溅

稳拿稳放，防止外溅

8．不同批号试剂盒中组分混淆

不同批号试剂，不能混用

9．瓶盖相互交叉使用

不同组分瓶盖间不能交叉使用

10．献血员冒名顶替

严格管理献血员

11．保温时间不一致

重复测定标本，反应条件、人员等尽可能与上次保持一致，以排除这些因素造成不一致的可能性，计时应以*滴 TMB的B液加入开始计时

12．洗涤条件不一致

13．显色条件时间不一致

14．操作人员不一致

15．洗涤不正确

用洗液注满各孔，但不要溢出。甩板时反应板面向下，垂直用力甩净内容物（可多甩几次），在干净、无或少尘的吸水材料上拍干。洗板机洗板时不应有堵孔，洗涤应充分

16．温育条件不一致（一次用水浴，一次用恒温箱）

恒温箱温育较水浴显色深， OD值高出0.10-0.15,均采用恒温箱，没有恒温箱者，水浴锅的水温应控制在37℃

17．唾液或其它杂物掉入孔内

用记号笔直圈上，便于分析

18．不慎加酶或底物液于孔壁上，有残留

用吸水纸吸干壁上残留的酶或底物液

19．不慎多加或少加酶或显色剂B

多加时显色深，少加则浅，用记号笔圈上，便于分析

20．阈值附近时阴时阳

重复做奇数次，以偶数次结果为准

21．标本离心处理不全，致使检测时于反应板孔内发生凝血现象或残留细胞成分干扰

血清或血浆应充分离心处理， 3000rpm6分钟以上