吖啶橙（AO）-EB 双染色试剂盒说明书
原理及作用：
　　　细胞凋亡的检测方法有形态学研究方法，生物化学研究方法，DNA 片段化检测方法，以 及 TUNEL 等标记片段化 DNA 方法，但从细胞凋亡概念产生的历史及准确性方面考虑，使用光 学显微镜及电子显微镜进行的形态学观察是很重要的。
　　　细胞死亡的检测方法有用荧光色素染色区分活细胞、死细胞，测定细胞代谢活性和形态 学观察。这些方法都是利用细胞凋亡这种情况进行测定的，因而不一定反映实际情况。MTT 法是测定线粒体中*酶的活性，反映细胞数目的变化，其结果与细胞死亡的数目未必一致。 所以，有必要采用多种方法判断细胞凋亡。
　　　吖啶橙嵌合到双链 DNA 分子中显绿色，与 DNA 单链或 RNA 结合时发橙色荧光。EB 嵌合 到 DNA 碱基对中间时发红色荧光。吖啶橙可透过活细胞膜，EB 不能通过与活细胞膜具有相 同通透性的细胞膜。
试剂：100ug/ml 的吖啶橙溶液（PBS 溶解），100ug/ml 的 EB 溶液（PBS 溶解）。

产品订购页面：http://www.sbjbio.com/Products/D1919.html

试剂盒组成

参考操作步骤

1、 每份样品中加入试剂（A）及试剂（B）各 1ul，混合均匀；

2、 500g 离心细胞 5min；

3、 用 PBS 重悬细胞，将细胞密度调整为 5x105-5x106/ml；

4、 每 25ul 细胞悬液中加入试剂（A）和试剂（B）混合液；

5、 在洁净的载玻片上加上 5ul 细胞悬液，盖上盖玻片，在荧光显微镜 B 域进行观察；

6、 显绿色荧光的为活细胞，显橙色荧光的为死细胞。

贮存

4℃,避光,4 个月

 注意事项

用能通过活细胞膜与 DNA 结合后发蓝色荧光的 Hoechist 33342 和只能通过死细胞与 DNA 结合后发红色荧光的碘化吡啶（ propidium iodide，PI）对细胞进行二重染色的方法也比较 常用。