牛牛天天人人综合影院 人新蝶呤（Npt）酶联免疫分析操作说明

【资料简介】

检测范围：  96T

0.8 μ g/L -20 μ g/L

使用目的：

本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中新蝶呤（Npt）含量。

实验原理

本试剂盒应用双抗体夹心法测定 标本 中 人新蝶呤（Npt） 水平。用纯化的 人新蝶呤（Npt） 抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入 新蝶呤（Npt），再与HRP标记的新蝶呤（Npt）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物 ，经过*洗涤后 加 底物TMB显色。TMB在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的 新蝶呤（Npt） 呈正相关。用酶标仪在 450 nm波长下测定吸光度（OD值）， 通过标准曲线 计算样品 中人新蝶呤（Npt） 浓度。

试剂盒组成

1	30倍浓缩洗涤液	20ml×1瓶	7	终止液	6ml×1瓶
2	酶标试剂	6ml×1瓶	8	标准 品（36 μ g/L）	0.5ml×1瓶
3	酶 标包被 板	12孔×8条	9	标准品 稀释液	1.5ml×1瓶
4	样品 稀释液	6ml×1瓶	10	说明书	1份
5	显色剂A液	6ml×1瓶	11	封板膜	2张
6	显色剂B液	6ml×1/瓶	12	密封袋	1个

标本要求

1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于 -20 ℃保存，但应 避免反复冻融

2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

操作步骤

1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

18 μ g/L	5号标准品	150 μ l的原倍标准品加入150 μ l标准品稀释液
12 μ g/L	4号标准品	150 μ l的5号标准品加入150 μ l标准品稀释液
6 μ g/L	3号标准品	150 μ l的4号标准品加入150 μ l标准品稀释液
3 μ g/L	2号标准品	150 μ l的3号标准品加入150 μ l标准品稀释液
1.5 μ g/L	1号标准品	150 μ l的2号标准品加入150 μ l标准品稀释液

2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、 待测样品孔 。在酶标包被板上标准品准确加样50 μ l，待测样品孔中先加样品稀释液40 μ l，然后再加待测样品10 μ l（样品终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁， 轻轻 晃动 混匀 。

3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30 分钟 。

4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用

5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体， 甩干 ，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶标试剂50 μ l，空白孔除外 。

7.温育：操作同3。

8.洗涤：操作同5。

9.显色：每孔先加入显色剂A50 μ l，再加入显色剂B50 μ l，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟.

10.终止：每孔加终止 液50μl，终止反应 （此时蓝色立转黄色） 。

11.测定：以空白空调零， 4 50 nm波长依序测量各孔的 吸光 度（OD值） 。测定应在加终止液后15分钟以内进行。