抗体保存指南

【资料简介】

抗体保存指南
抗体保存得当与否，直接决定了抗体的活性和使用效果！如果抗体保存得当，大部分抗体活性都可以维持数月甚至数年。 本指南以 abcam 抗体保存方法为主，同样也可以应用到其他绝大部分抗体产品！ 请谨记！无论何时请按照说明书推荐的保存条件正确保存抗体！ 1. 收到抗体后请务必在 12000rpm 离心 20-30s 后再打开管盖进行分装和保存！ Abcam 的抗体使用非常特殊的储存管，只有在 12000rpm 离心 20-30s 才能将附着在管壁或盖内的抗体全部离心下来。即使是在 10000rpm 离心也会导致离心不*，导致出现抗体的量不足的现象！ 2. 对于 abcam 大部分抗体，比较合适的保存方式是分装后保存在  -20oC or -80oC 。 对绝大多数抗体来说，保存在 -20oC 是*足够了。没有任何证据显示保存在 -80oC 会有更多的好处！ 分装可以zui大程度的降低反复冻融对抗体活性的损害，同时也降低了由于多次从同一管中吸取抗体造成的污染可能性。 分装的量以一次实验用完为好，zui少不能少于 10ul 每份。因为分装体积越小，抗体的浓度越可能会受到蒸发以及管壁吸附的影响 复融后的分装抗体如果一次用不完，将剩余母液保存在 4oC ，避免再冻起来！ 抗体工作液应该当天配制当天用完，在 4oC 尽量不要超过 1 天。 避免将抗体保存在自动除霜冰箱中。尽量将抗体保存在冰箱里层，而不是门上 3. 大部分抗体收到后 4oC 短暂保存 1-2 周对抗体活性是没有影响的。 如果抗体很快（ 1-2 周）会使用，推荐在 4oC 保存，这是为了避免反复冻融对抗体活性的损害。如果要长期保存则是在 -20oC or -80oC 。zui关键的一点是要根据说明书推荐的方式来正确的保存抗体！ 但是，腹水形式的产品请在收到后立即冻起来！因为该类产品含有大量的蛋白酶，长期在 4oC 保存会导致抗体的降解！ 4. 大部分抗体的运输条件：一般的运输过程需要 1-2 周的时间，所以是在 4oC 的条件下来完成的。    4oC 运输zui主要的目的是为了避免反复冻融对抗体活性的损害（如果使用干冰运输，那么收到时抗体是冻起来的，为了分装就需要解冻。这就多了一次冻融的过程）。所以运输过程中避免干冰运输！ 特殊抗体的保存条件： 酶联抗体：永远保存在 4oC ，避免冻起来。否则会导致酶活性的下降或者丧失 偶联抗体：所有偶联抗体都是在棕色管中或使用锡箔纸避光保存。尤其是荧光抗体，对光极为敏感，因此在所有的实验阶段也是要避光操作的！ IgG3 的同型对照：永远保存在 4oC ，避免冻起来。因为如果出现冻融过程，该抗体非常容易形成多聚体 无论是保存还是运输，避免反复冻融！ 反复冻融会导致抗体变性，导致多聚体形成，从而降低抗体的结合能力！ 抗体保存其它相关信息： 关于加入甘油保存： 有些人会加 50% 的甘油到抗体中来避免反复冻融，甘油在 -20oC 会降低冰点。这对很多抗体可能是可行的。但是 abcam 仅对非常小的一部分抗体检测过其在这种条件下的稳定性；而 abcam 只对按照推荐条件保存的抗体提供质量保证！加入甘油的溶液不建议在 -80oC 保存，因为这已经超过了甘油的冰点。如果您要加入甘油来保存抗体的话，请谨慎注意无菌操作，避免污染！ 关于蛋白保护剂： 蛋白在高浓度时更不容易降解（ 1 mg/ml 或者更高），这就是为什么在抗体中加入 BSA 之类作为稳定剂的原因了；另一方面，加入的蛋白也可以减少抗体由于管壁吸附所造成的损失。但是如果抗体要用来标记的话，则不能加入蛋白稳定剂，因为这些稳定剂会和抗体一起竞争结合标记物。 关于*（ sodium azide ）的使用： 为了防止微生物污染，*经常被加入到抗体中（终浓度 0.02% （w/v） ）。 Abcam 的很多抗体已经含有了 0.02 ％ -0.05% 的*，在说明书的 “Storage buffer” 中有标明的。 在下述情况中不能使用*： 如果抗体用于染色或处理活细胞，用于体内研究： *在抵抗微生物的同时，对其它大部分有机物也是有毒的，因为它阻断了线粒体的 cytochrome electron transport system. 要偶联带有氨基基团的抗体： *会干扰任何含有氨基基团的偶联，因此在进行偶联之前，应将*去除。偶联后的抗体可以加入*保存，但是浓度只能是 0.01 ％。对于需要偶联的抗体， thimerosal （merthiolate） 可以替代*作为保护剂！ 注：*的去除方式： 可以通过凝胶电泳或过滤的方式去除！ IgG 的分子量是 150kDa （IgM 是 ~ 600kDa）; *的分子量只有 65Da 。使用 cut off 14kDa 的滤膜即可将*从抗体中去除。

用相应的稀释液稀释，里面的保护蛋白和防腐剂会使保存效果好一些，另外不要冻融，不小心冻上问题也不大，用酶标稀释液稀释的酶或用小牛血清＋防腐剂稀释的抗血清4° 保存半年没有问题。