技术中心

仓鼠核因子κB受体活化因子配基(RANKL)elisa试剂盒技术参数

2022年01月21日 14:41:18人气:135来源:上海一研生物科技有限公司

资料类型 docx文件 资料大小 14688
下载次数 55 资料图片 【点击查看】
上 传 人 上海一研生物科技有限公司 需要积分 0
关 键 词 仓鼠核因子κB受体活化因子配基(RANKL)elisa试剂盒,仓鼠核因子κB受体活化因子配基(RAN
【资料简介】

仓鼠核因子κB受体活化因子配基(RANKL)elisa试剂盒 说明书

试验原理:

TRH试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验( ELISA . 已知 TRH 浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将 TRH 和生物su标记的抗体同时温育。洗涤后,加入亲和素标记过的HRP 。再经过温育和洗涤,去除未结合的酶结合物,然后加入底物 A B ,和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中 TRH 的浓度呈比例关系。

试剂盒内容及其配制

试剂盒成份(2-8℃保存) 96 孔配置 48 孔配置 配制

96/48人份酶标板 1 块板( 96T ) 半块板( 48T ) 即用型

塑料膜板盖 1块 半块 即用型

标准品:24ng/ml 1瓶( 0.6ml 1 瓶( 0.3ml ) 按说明书进行稀稀

空白对照 1瓶( 1.0ml 1 瓶( 0.5ml ) 即用型

标准品稀释缓冲液 1瓶( 5ml 1 瓶( 2.5ml ) 即用型

洗涤缓冲液 1瓶( 20ml 1 瓶( 10ml ) 按说明书进行稀释

底物A 1瓶( 6.0ml 1 瓶( 3.0ml ) 即用型

生物su标记的抗TRH抗体 1 瓶( 6ml 1 瓶( 3.0ml ) 即用型

亲和链酶素-HRP 1瓶( 10ml 1 瓶( 5.0ml ) 即用型

底物B 1瓶( 6.0ml 1 瓶( 3.0ml ) 即用型

终止液 1瓶( 6.0ml 1 瓶( 3.0ml ) 即用型

仓鼠核因子κB受体活化因子配基(RANKL)elisa试剂盒 自备材料

1. 蒸馏水。

2. 加样器: 5ul 10ul 50ul 100ul 200 500ul 1000ul

3. 振荡器及磁力搅拌器等。

安全性

1. 避免直接接触终止液和底物 A B 。一旦接触到这些液体,请尽快用水冲洗。

2. 实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。

3. 不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。

操作注意事项

1. 试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。

2. 实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。

3. 不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。

4. 使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物 A B 液时,避免使用带金属部分的加样器。

5. 使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。

6. 洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。

7. 底物 A 应挥发,避免长时间打开盖子。底物 B 对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取 OD 值。

8. 加入试剂的顺序应一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样。

9. 按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。

仓鼠核因子κB受体活化因子配基(RANKL)elisa试剂盒 样品收集、处理及保存方法

1、 血清 ----- 操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后, 1000 × g 离心 10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

2、 血浆 -----EDTA 、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。 1000 × g 离心 30 分钟去除颗粒。

3、 细胞上清液 ---1000 × g 离心 10 分钟去除颗粒和聚合物。

4、 保存 ------ 如果样品不立即使用,应将其分成小部分 -70 ℃保存,避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒,检测前先离心或过滤。不要在 37 ℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

试剂的准备

1. 标准品:标准品的系列稀释应在实验时准备,不能储存。稀释前将标准品振荡混匀。稀释比例按下表中进行:

24 ng/ml 6 号标准品) 原倍浓度不用稀释直接加入 50ul

12 ng/ml 5 号标准品) 100ul 的原倍标准品加入 100ul 的标准品稀释液

6.0 ng/ml 4 号标准品) 100ul 5 号标准品加入 100ul 的标准品稀释液

3.0 ng/ml 3 号标准品) 100ul 4 号标准品加入 100ul 的标准品稀释液

1.5 ng/ml 2 号标准品) 100ul 3 号标准品加入 100ul 的标准品稀释液

0.75 ng/ml 1 号标准品) 100ul 2 号标准品加入 100ul 的标准品稀释液

0 ng/ml (空白对照) 原始浓度不用稀释直接加入 50ul

2. 洗涤缓冲液( 50 ×)的稀释:蒸馏水 50 倍稀释。

操作步骤

1. 使用前,将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫,以免加样时加入大量的气泡,产生加样上的误差。

2. 根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定,能使用复孔的尽量做复孔。

3. 加入稀释好后的标准品 50ul 于反应孔、加入待测样品 50ul 于反应孔内。立即加入 50ul 的生物su标记的抗体。盖上膜板,轻轻振荡混匀,37 ℃温育 1 小时。

4. 甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡 30 秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作 3 次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。

5. 每孔加入 80ul 的亲和链酶素 -HRP ,轻轻振荡混匀, 37 ℃温育 30 分钟。

6. 甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡 30 秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作 3 次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。

7. 每孔加入底物 A B 50ul ,轻轻振荡混匀, 37 ℃温育 10 分钟。避免光照。

8. 取出酶标板,迅速加入 50ul 终止液,加入终止液后应立即测定结果。

9. 在 450nm 波长处测定各孔的 OD 值。

建议使用的实验方案

仓鼠核因子κB受体活化因子配基(RANKL)elisa试剂盒 标准品浓度(ng/ml

A 24 24 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品

B 12 12 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品

C 6.0 6.0 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品

D 3.0 3.0 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品

E 1.5 1.5 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品

F 0.75 0.75 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品

G 0 0 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品

H 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品

局限

6号标准品以上的结果为非线性的,根据此标准曲线无法得到的结果。

试剂盒性能

1. 灵敏度: zui 小的检测浓度小于 1 号标准品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数 R 值为 0.990

2. 特异性:不与其它细胞因子反应。

3. 重复性:板内、板间变异系数均小于 10%

1、仪器值:于波长 450nm 的酶标仪上读取各孔的 OD

2、以吸光度 OD 值为纵坐标( Y ),相应的 TRH 标准品浓度为横坐标( X ),做得相应的曲线,样品的 TRH 含量可根据其 OD 值由标准曲线换算出相应的浓度。

3、检测值范围: 0-24ng/ml

4、敏感度: 0.1 ng/ml


上海一研生物科技有限公司作者

上一篇:清洗塑料污水处理一体化设备

下一篇:德国HYDRO-BIOS公司管状浮游生物计数框操作演示


我要投稿
  • 投稿请发送邮件至:(邮件标题请备注“投稿”)[email protected]
  • 联系电话0571-87759680
环保行业“互联网+”服务平台
环保在线APP

功能丰富 实时交流

环保在线小程序

订阅获取更多服务

微信公众号

关注我们

抖音

环保在线网

抖音号:hbzhan

打开抖音 搜索页扫一扫

视频号

环保在线

公众号:环保在线

打开微信扫码关注视频号

快手

环保在线

快手ID:2537047074

打开快手 扫一扫关注
意见反馈