牛牛天天人人综合影院 牛伪狂犬病毒（PRV）定性检测试剂盒（ELISA）

【资料简介】

本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断。

牛伪狂犬病毒（ PRV ）定性检测试剂盒（ ELISA ）

使用说明书

【试剂盒名称】

牛伪狂犬病毒（ PRV ）定性检测试剂盒（ ELISA ）

【试剂盒用途】

定性检测牛血清、血浆及相关液体样本中伪狂犬病毒（ PRV ）。

【检测原理】

本试剂盒采用双抗体一步夹心酶联免疫吸附法（ ELISA ）。将阴性对照、阳性对照、待测样本和酶标工作液加入到预先包被牛伪狂犬病毒（ PRV ）抗体的透明酶标包被板中，温育足够时间后，洗涤除去未结合的成分。依次加入显色剂 A 、 B 液，显色剂（ TMB ）在辣根过氧化物酶（ HRP ）催化下转化为蓝色产物，在酸的作用下变成黄色，颜色的深浅与样品中牛伪狂犬病毒（ PRV ）浓度呈正相关， 450nm 波长下测定 OD 值，根据阴性对照、阳性对照和样品的 OD 值，判断样本中是否含有牛伪狂犬病毒（ PRV ）。

【试剂盒组成】

1	酶标包被板	12 孔 ×8 条	7	显色剂 A 液	6mL
2	阴性对照	0.6mL	8	显色剂 B 液	6mL
3	阳性对照	0.6mL	9	终止液	6mL
4	20 倍浓缩洗涤液	25mL	10	说明书	1 份
5	样本 稀释液	6mL	11	封板膜	2 张
6	酶标试剂	10mL	12	密封袋	1 个

【需要而未提供的试剂和器材】

1 、 37 ℃ 恒温箱

2、 标准规格酶标仪

3、 精密移液器及一次性吸头

4、 蒸馏水

5、 一次性试管

6、 吸水纸

【操作步骤】

1 、准备：从冰箱取出试剂盒，室温复温平衡 30 分钟。

2 、配液：用蒸馏水将 20 倍浓缩洗涤液稀释成原倍的洗涤液。

3 、加对照品和待测样本：取足够数量的 酶标包被板，固定于框架上， 分别设置阳性对照孔、阴性对照孔、待测样本孔和空白对照孔，记录各孔位置，在对照品孔中加入阳性对照品和阴性对照品各 50μL ；待测样本孔中先加入待测样本 10μL ，再加* 40μL （即样本稀释 5 倍）；每孔再加入酶标工作液 100μL ；空白对照孔不加。

4 、温育： 37 ℃ 水浴锅或恒温箱温育6 0min 。

5 、洗板：弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置 1min ，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板 5 次（也可用洗板机按说明书操作洗板）。

6 、显色：每孔先加入显色剂 A 液 50μL ，再加入显色剂 B 液 50μL ， 37 ℃ 避光显色15min。

7 、终止： 取出酶标板，每孔加终止液 50μL ，终止反应（颜色由蓝色立转黄色）。

8 、测定： 以空白孔调零，在终止后 15 分钟内，用 450nm 波长测量各孔的吸光值（ OD 值）。

【样本要求】

1 、样本 不能含叠氮钠（NaN₃） ，因为 叠氮钠（NaN₃）是 辣根过氧化物酶（HRP）的抑制剂。

2、 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能立即试验，可 将标本放于 -20 ℃ 保存，但应避免反复冻融。

3 、样本应充分离心，不得有溶血及颗粒。

【注意事项】

1 、实验严格按照说明书的操作进行，实验结果判定必须以酶标仪读数为准。

2 、 酶标包被板开封后如未用完，应立即装入密封袋中加干燥剂保存。

3 、建议所有的标准品、样本和空白对照都做双份检测，取平均值，以减小实验误差。

4 、若显色过浅，可适当延长底物温育时间。

5 、为避免交叉污染，标准品、样本和空白对照每加一个就要更换一次吸头； 酶标 工作液、*和底物等公共组分，要悬臂加样，不得碰到微孔 ；不得重复使用 封板膜 。

6 、试剂盒保质期内使用，不同批号的试剂不得混用。

7 、底物 B 对光敏感，避免长时间暴露于光下。

【结果判断】

1 试验有效性：阳性对照孔OD值平均值≥1.00；

阴性对照孔OD值平均值≤0.15。

2 临界值（Cut off）计算：临界值=阴性对照孔平均值+0.15

3 阴性判断：样品OD值＜临界值（Cut off），样品为阴性

4 阳性判断：样品OD值＞临界值（Cut off），样品为阳性

【操作程序总结】

准备试剂，样品和对照品

加入准备好的样品、对照品品和酶标工作液， 37℃反应60分钟

洗板5次，加入显色液A、B， 37℃显色15分钟

加入终止液

15 分钟之内读OD值

计算

【规格】

96 人份/盒

【贮藏】

2-8 ℃ ，避光防潮保存。

【有效期】

6 个月