女人天天干夜夜爽视频 细胞计数及活力测定方法

【资料简介】

一、原理
培养的细胞在一般条件下要求有一定的密度才能生长良好 , 所以要进行 细胞计数 . 计数结果以每毫升细胞数表示 . 细胞计数的原理和方法与血细胞计数相同 .
在细胞群体中总有一些因各种原因而死亡的细胞 , 总细胞中活细胞所占的百分比叫做细胞活力 , 由组织中分离细胞一般也要检查活力 , 以了解分离的过程对细胞是否有损伤作用 . 复苏后的细胞也要检查活力 , 了解冻存和复苏的效果 .
用台盼兰染细胞 , 死细胞着色 , 活细胞不着色 , 从而可以区分死细胞与活细胞 . 利用细胞内某些酶与特定的试剂发生显色反应 , 也可测定细胞相对数和相对活力 .
二、仪器、用品与试剂
1 、仪器与用品：普通显微镜、血球计数板、试管、吸管、酶标仪（或分光光度计）
2 、试剂： 0.4 ％台盼兰 ,0.5 ％四甲基偶氮唑盐（ MTT ）、酸化异丙醇
3 、材料：细胞悬液
三、操作步骤
（一）细胞计数
1 、将血球计数板及盖片用擦试干净 , 并将盖片盖在计数板上 .
2 、将细胞悬液吸出少许 , 滴加在盖片边缘 , 使悬液充满盖片和计数板之间 .
3 、静置 3 分钟 .
4 、镜下观察 , 计算计数板四大格细胞总数 , 压线细胞只计左侧和上方的 . 然后按下式计算：
细胞数 /ml ＝ 4 大格细胞总数 / 4×10000
注意：镜下偶见由两个以上细胞组成的细胞团 , 应按单个细胞计算 , 若细胞团占 10% 以上 , 说明分散不好 , 需重新制备细胞悬液 .
（二） 细胞活力
1 、将细胞悬液以 0.5ml 加入试管中 .
2 、加入 0.5ml 0.4% 台盼兰染液 , 染色 2 一 3 分钟 .
3 、吸取少许悬液涂于载玻片上 , 加上盖片 .
4 、镜下取几个任意视野分别计死细胞和活细胞数 , 计细胞活力 .
死细胞能被台盼兰染上色 , 镜下可见深兰色的细胞 , 活细胞不被染色 , 镜下呈无色透明状 .
活力测定可以和细胞计数合起来进行 , 但要考虑到染液对原细胞悬液的加倍稀释作用 .
（三） MTT 法测细胞相对数和相对活力
活细胞中的琥珀酸脱氢酶可使 MTT 分解产生兰色结晶状甲赞颗粒积于细胞内和细胞周围 . 其量与细胞数呈正比 , 也与细胞活力呈正比 .
l 、细胞悬液以 1000rpm 离心 10 分钟 , 弃上清液 .
2 、沉淀加入 0.5 － 1ml MTT, 吹打成悬液 .
3 、 37 ℃ 下保温 2 小时 .
4 、加入 4—5 ml 酸化异丙醇（定容） . 打匀 .
5 、 1000 rpm 离心 , 取上清液酶标仪或分光光度计 570nm 比色 , 酸化异丙醇调零点 .
注意： MTT 法只能测定细胞相对数和相对活力 , 不能测定细胞数 .
附： 1 、 0.4% 台盼兰染液配制：
台盼兰 0.4 克 加双蒸水至 100 ml.
2 、 MTT 配制：
MTT 0.5 克 , 溶于 100 ml 的磷酸缓冲液或无酚红的基础液中 .4 ℃ 下保存 .
3 、酸化异丙醇配制：
异丙醇中加入 HCl 使zui终达 0.04mol/L.