牛牛天天人人综合影院 猪伪狂犬gE鉴别ELISA诊断试剂盒使用说明书

【资料简介】

猪伪狂犬 gE 鉴别 ELISA 诊断试剂盒使用说明书

【用途】

猪伪狂犬病毒gE鉴别ELISA诊断试剂盒用于检测猪血清中抗伪狂犬病毒gE蛋白的抗体。用于区别临床野毒感染猪和用gE基因缺失疫苗免疫的猪。

【简介】

试剂盒由抗原包被的微孔板，酶标羊抗猪IgG及其它试剂制成，应用间接ELISA原理检测猪血清中抗伪狂犬病毒gE蛋白的抗体。

【原理】

本试剂盒是采用猪伪狂犬病毒gE基因的工程表达产物包被微孔板，在试验中，按操作步骤加入对照血清和待检血清，经温育后，若样品中含有抗猪伪狂犬病毒gE蛋白的特异性抗体，则将与检测板上抗原结合，经洗涤除去未结合的抗体和其他成分后；再加入酶标二抗，与检测板上抗原抗体复合物发生特异性结合；再经洗涤除去未结合的酶结合物，在孔中加TMB底物液，与酶反应形成蓝色产物，加入H₂SO₄ 溶液终止反应后，用酶标仪450nm波长测定各反应孔中的OD值,建议用双波长检测（450nm、630nm）。

【试剂盒主要成分】

1 、	包被抗原的微孔板	2 块	（ 96 孔 / 块）
2 、	阴（绿盖）、阳（红盖）性对照血清	各 1 管	（ 1ml/ 管）
3 、	抗猪 IgG-HRP 结合物 （黄盖）	1 瓶	（ 22ml/ 瓶）
4 、	20 倍浓缩洗涤液 （白盖）	1 瓶	（ 30ml/ 瓶）
5 、	底物 A （紫盖）液、 B （黄盖）液	各 1 瓶	（ 12ml/ 瓶）
6 、	终止液 （蓝盖）	1 瓶	（ 12ml/ 瓶）
7 、	样品稀释液 （ 透明盖 ）	1 瓶	（ 50ml/ 瓶）
8 、	说明书		1 份

【用前制备】

仔细阅读说明书，所有试剂在4℃条件下保存，禁止结冰，如果干燥带发红不能使用，不用的孔必须密封好以防潮湿对平板有害，不要是平板接触强光和氧化物。不要使用过期的成分或混合使用成分。注意加样和冲洗，以确保试验的度和准确度。操作过程中注意安全，要带手套，终止液含有硫酸使用要小心。所有的废液要经过处理和净化。

【未提供的需用材料】

微量加样器、加液槽、蒸馏水、恒温箱、酶标仪、吸水纸

【注意事项】

1 、试剂盒使用前各试剂应平衡至室温。

2 、不同批号试剂盒的试剂组分不得混用。

3 、注意防止试剂盒各组分受污染。

4 、微孔板拆封后避免受潮或沾水 （ 每次将剩余的微孔板用封口袋扎紧后尽快置于 4 ℃ ） 。

【试剂配制】

洗涤液：用蒸馏水稀释 20 倍 浓缩洗涤液，混匀。

【操作步骤】

1、 取预包被的微孔板（根据样品多少，可拆开分次使用），用样品稀释液将待检样品 40 倍 稀释后加入板孔中，每孔加 100μl 。阴、阳性对照（阴、阳性对照不稀释）各设 2 孔，每孔 100μl 。另设一空白对照孔，空白对照孔加 100μl 稀释液。轻轻振匀孔中样品（勿溢出），置 37 ℃ 温育 30min 。

2、 甩掉板孔中的溶液，用洗涤液洗板 5 次， 300μl/ 孔，每次静置 60 秒倒掉，zui后一次在不掉屑干净吸水纸上拍干。

3、 每孔加酶标二抗（抗猪 IgG-HRP 结合物） 100μl ，置 37 ℃ 温育 30min 。

4、 洗涤 5 次，方法同 2 。

5、 每孔加底物 A 液、 B 液各 50μl ，混匀， 37 ℃避光显色 10 分钟 。

6、 每孔加终止液 50μl ，混匀，置酶标仪 450nm 处测各孔 OD 值（建议用双波长 450nm 、 630nm ）。 10 分钟内测定结果。

【结果判定】

1、 阴性对照：正常情况下，阴性对照孔 OD₄₅₀ 值 ≤0.1 ；

2、 阳性对照：正常情况下，阳性对照孔 OD₄₅₀ 值 ≥0.4 ；

3、 临界值（ C.O. ）的计算：临界值 =0.15+ 阴性对照孔均值；所有阴性、阳性对照和样品的 OD₄₅₀ 值均须减去空白平均值后作为计算值；阴性对照孔 OD₄₅₀ 值大于 0.10 时应舍弃，如所有阴性对照孔 OD₄₅₀ 值都大于 0.10 时须重复实验；阴性对照孔低于 0.05 时以 0.05 计算。

4、 结果判定：检测标本 OD₄₅₀ 值 ≥ 临界值判定为本试验阳性；检测标本 OD₄₅₀ 值＜临界值判定为阴性。

【规格】 96 孔 ×2块

【有效期】 12 个月

【贮存】 2-8 ℃避光保存

【生产日期】 见试剂盒外包装