男女呻吟久久免费视频 大豆异黄酮（SOY）酶联免疫分析（ELISA）

【资料简介】

大豆异黄酮（SOY）酶联免疫分析（ ELISA ）

试剂盒使用说明书

本试剂盒仅供研究使用。

1 使用目的：

本试剂盒用于血清、血浆和尿样中大豆异黄酮 （SOY） 残留的定量检测。

2 实验原理

本试剂盒采用直接竞争 ELISA 方法，在微孔板包被有 大豆异黄酮 （SOY） 偶联抗原，加入 大豆异黄酮 （SOY） 标准品或样品，游离 大豆异黄酮 （SOY） 微孔条上预包被的 大豆异黄酮 （SOY） 偶联抗原互相竞争抗 大豆异黄酮 （SOY） 抗体酶标记物，用 TMB 底物显色，加入终止液后颜色由蓝色变为黄色，用酶标仪在 450nm 波长下进行检测，吸光值与样品中 大豆异黄酮 （SOY） 含量成反比，通过标准曲线计算样品中 大豆异黄酮 （SOY） 的含量。

3 试剂盒组成

3.1 预包被的 大豆异黄酮 （SOY） 偶联抗原的可拆酶标板： 1 块（ 12 孔 ×8 条）。
3.2 大豆异黄酮 （SOY） 标准品： 6 瓶（ 1ml/ 瓶），含量分别是： 0 μ g/ml, 0.5 μ g/ml,1.5 μ g/ml,4.5 μ g/ml,13.5 μ g/ml,40.5 μ g/ml 。

3.3 抗 大豆异黄酮 （SOY） 抗体酶结合物： 1 瓶（ 6ml ）。
3.4 显色液 A ： 1 瓶（ 6ml ）。
3.5 显色液 B ： 1 瓶（ 6ml ）。
3.6 终止液： 1 瓶（ 6ml ）， 2M 硫酸。
3.7 样本稀释液： 1 瓶（ 10×, 6ml ），用于样品稀释用。
3.8 浓缩洗涤液： 1 瓶（ 20× ， 20ml ），用于洗板。
3.9 说明书一份。

4 需要而未提供的材料
4.1 设备
4.1.1 波长 450nm 酶标仪。
4.1.2 粉碎机。
4.1.3 量筒。
4.1.4 振荡器。
4.1.5 漏斗。
4.1.6Whatman 或相当的滤纸。
4.1.7 微量移液器。
4.2 试剂
4.2.1 去离子水或蒸馏水。
4.2.2 甲醇。
5 贮存
5.1 试剂盒贮存于 2~8 ℃ ，切勿冷冻
5.2 未用完的微孔板应该密封干燥保存
6 注意事项
6.1 使用试剂盒前请仔细阅读说明书。
6.2 不要使用过期试剂盒。
6.3 试剂盒使用前，将试剂恢复至室温（ 25±2 ℃ ），建议至少回温 2 小时。
6.4 标准品中含有大豆异黄酮 （SOY） ，使用时应特别注意，操作时应带手套。
6.5 终止液中含有硫酸，使用时防止灼伤皮肤及腐蚀衣物。
6.6 不同标准品、样品所用吸头不能混用，否则会影响试验结果。
6.7 不同批号试剂盒中的试剂不得混用；不同标准品、样品所用吸头不得混用，否则会影响实验结果。
6.8 稀释样本时必须用本试剂盒中的样本稀释液，否则会影响实验结果
6.9 混合试剂时应避免起泡。
7 工作液准备
7.1 大豆异黄酮 （SOY） 标准品溶液： 0 μ g/ml, 0.5 μ g/ml,1.5 μ g/ml,4.5 μ g/ml,13.5 μ g/ml,40.5 μ g/ml
7.2 浓缩洗涤液：用蒸馏水按 1:20（1+19） 稀释备用

7.3 样本稀释液：已备用
7.3 显色剂：已备用，避免光线直照
7.4 反应终止液：已备用
8 样品处理： （样品在提取过程中，要严格按说明书操作，提取过程中应准确稀释，否则会出现结果不准确，样品应当保存在阴凉避光之处及冷藏保存）

一般样品处理

8.1 取 10g 粉碎的样品，加 20ml 70% 甲醇溶液
8.2 强力振荡 3 分钟
8.3 用 Whatman 滤纸过滤
8.4 取 100µl 处理后的样品，加入 400µl 样本稀释液
8.5 取 100μl 稀释液进行分析

动物组织前处理

8.6 准确称取 1 ± 0.05 g 匀浆后的组织样品到 50 ml 的聚苯乙烯离心管中；加入 3ml 乙腈 -- 丙酮提取溶液， 2000rpm 剧烈震荡 20s 后 4000r/min 以上离心 5min

8.7 取上清液 0.8ml 在 50℃ 氮气流下吹干

8.8 加入 3.2mL 样品稀释液 , 750rpm 涡旋 20s

8.9 取 100 m l 用于分析

饲料前处理方法

8.10 准确称取 1 ± 0.05 g 粉碎饲料样品到 50 ml 的聚苯乙烯离心管中；加入 4ml 乙腈， 1ml 丙酮， 2000rpm 剧烈震荡 20s 后 4000r/min 以上离心 3min

8.11 取上清液 0.7ml 在 50℃ 氮气流下吹干

8.12 加入 2.8mL 样品稀释液 , 涡旋 20s ，混匀后取 100 m l 用于分析

牛奶前处理方法

8.13 取 1 ml 牛奶样品到 5 ml 聚苯乙烯离心管中；加入 4ml 样品稀释液，混匀后取 100 m l 用于分析

奶粉前处理方法

8.14 准确称取 0.3g 奶粉样品到 7 ml 的聚苯乙烯离心管中；加入 2ml PBS 溶液， 2 ml 正己烷，震荡混匀

8.154000r/min 以上离心 5min ，去除有机层和中间层，取下层溶液 100 m l 到 400 m l 样品稀释液

8.16 混匀后取 100 m l 用于分析

9 酶免分析步骤
9.1 实验须知
9.1.1 实验开始前请将所有试剂于盒外充分恢复至室温（ 25±2 ℃ ），时间约 2 小时。回温至室温（ 25±2 ℃ ）后再取出微孔条，多余的微孔条重新密封立即于 2~8 ℃ 干燥保存
注：一定保证回温充分，否则影响检测的度和准确度。
9.1.2 使用后请立即将试剂放回 2~8 ℃ 保存
9.1.3 请不要改变分析程序
9.1.4 请使用的微量移液器
9.1.5 操作一旦开始，请不要中断任何程序
9.1.6 ELISA 结果的可重复性极大程度的取决于操作程序，请严格按照要求操作
9.1.7 为避免交叉污染，每个标准品和样品均应使用不同的吸头加样
9.1.8 加样时请勿让吸头接触微孔中的溶液或内表面
9.2 分析步骤
9.2.1 预*行编号，标记 B0 、标准品和样品的位置，推荐进行双孔检测
9.2.2 取所需数量的微孔（微孔条可拆），将多余板条重新密封并立即放回 2~8 ℃ 保存
9.2.3 样品稀释液、浓缩洗涤液（ 20× ）稀释成工作液 （ 蒸馏水或去离子水稀释 ）
9.2.4 在 B0 孔中加入 50µl0.0 μ g/ml 标准品溶液
9.2.5 在各标准孔中加入 50μl 的标准品溶液
9.2.6 在各样品孔中加入 50µl 样品溶液
9.2.7 在所有孔中加入 50µl 的抗除虫菊酯抗体酶结合物
9.2.8 轻轻晃动反应板几秒钟。
9.3 37 ℃ 温浴 30min （温浴过程中不时轻拍反应板，可以减少双孔误差）
9.3.1 甩掉孔中液体，用洗液洗涤微孔板 5 次，zui后一次应在吸水纸上拍打以*除去孔中液体。
9.4 反应
9.4.1 洗涤程序完成后，立即用微量移液器在每个微孔中先加入 50µl 显色液 A ，再加 50µl 显色液 B ；轻微晃动反应板使之*混匀
9.4.2 37 ℃ 温浴 10min
9.4.3 每孔中加入 50µl 终止液，混匀
9.4.4 在 450nm 下检测吸光度，结果在 5min 内读取。
10 结果计算
10.1 定量分析
10.1.1 所获得的每个浓度标准溶液和样本吸光度值的平均值（ B ）除以*个标准（ 0 标准）的吸光度值（ B0 ）再乘以 100% ，即百分吸光度值。
B— 标准溶液或样本溶液的平均吸光度值
B0—0 μ g/ml 标准溶液的平均吸光度值
10.1.2 以大豆异黄酮 （SOY） 浓度的对数值为 X 轴，百分吸光度值为 Y 轴，绘制标准曲线图。根据样品百分吸光度值，可从曲线上得到对应点的横坐标，即为大豆异黄酮 （SOY） 浓度的对数值，求得反对数即为测定液中大豆异黄酮 （SOY） 浓度 C （μ g/ml ）
10.1.3 由于样品经过了预先稀释，因此根据标准曲线所得出的样品浓度一定要再乘以其稀释倍数。
10.2 半定量测定
10.1.1 目测半定量测定：首先选择一个适当的标准液与样品同运行，根据样品与标准品吸光度值的高低比较，判断样品浓度值是小于还是大于标准值。
10.1.2 仪器半定量测定：首先选择一个适当的标准液与样品同运行，根据样品与标准品颜色深浅比较，判断样品浓度值是小于还是大于标准值。

11 特异性
物质 交叉反应
大豆异黄酮 （SOY） 100%

12 试剂盒参数
本试剂盒检测下限为 0.5 μ g/ml
B0 吸光度*值应大于 1.0
试剂盒吸光度板内误差小于 8 ％，板间误差小于 15 ％。
用本说明书提供的组织样本提取方法回收率大于 80 ％。
13 标准曲线模式（仅供参考）
试剂盒提供的标准曲线范围为 0.5 μ g/ml ~40.5 μ g/ml 。