男女呻吟久久免费视频 兔子Ⅰ型前胶原羧基端肽（PⅠCP）elisa试剂盒使用说明书

【资料简介】

兔子Ⅰ型前胶原羧基端肽（PⅠCP） elisa试剂盒 使用说明书

保存条件及有效期：

试剂盒保存： 2-8 ℃ |有效期： 6 个月

【 兔子Ⅰ型前胶原羧基端肽（PⅠCP） elisa试剂盒】 样本处理及要求 ：

1.血清：室温血液自然凝固 10-20 分钟，离心 20 分钟左右（ 2000-3000 转 / 分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。

2.血浆：应根据标本的要求选择 EDTA 或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合 10-20 分钟后，离心 20 分钟左右（ 2000-3000 转 / 分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。

3.尿液：用无菌管收集，离心 20 分钟左右（ 2000-3000 转 / 分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。

4.细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心 20 分钟左右（ 2000-3000 转 / 分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用 PBS （ PH7.2-7.4 ）稀释细胞悬液，细胞浓度达到 100 万 /ml 左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心 20 分钟左右（ 2000-3000 转 / 分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

5.组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的 PBS ， PH7.4 。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持 2-8 ℃的温度。加入一定量的 PBS （ PH7.4 ），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心 20 分钟左右（ 2000-3000 转 / 分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。

6.标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可 将标本放于 -20 ℃保存，但 应 避免反复冻融 .

7. 不能检测含NaN3的样品 ，因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（ HRP ）活性。

操作步骤

1. 标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10 孔，在*、第二孔中分别加标准品 100 μ l，然后在*、第二孔中加标准品稀释液 50 μ l，混匀；然后从*孔、第二孔中各取 100 μ l分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液 50 μ l，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取 50 μ l弃掉，再各取 50 μ l分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液 50ul ，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取 50 μ l分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液 50 μ l，混匀后从第七、第八孔中分别取 50 μ l加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液 50 μ l，混匀后从第九第十孔中各取 50 μ l弃掉。（稀释后各孔加样量都为 50 μ l，浓度分别为 1800ng/L ， 1200ng/L ， 600ng/L ， 300ng/L ， 150ng/L ）。

2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、 待测样品孔 。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40 μ l，然后再加待测样品 10 μ l（样品zui终稀释度为 5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁， 轻轻 晃动 混匀 。

3. 温育：用封板膜封板后置37 ℃温育3 0 分钟 。

4. 配液：将30 （ 48T 的 20 倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 （ 48T 的 20 倍）倍稀释后备用。

5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体， 甩干 ，每孔加满洗涤液，静置30 秒后弃去，如此重复 5 次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶标试剂50 μ l，空白孔除外 。

7. 温育：操作同3 。

8. 洗涤：操作同5 。

9. 显色：每孔先加入显色剂A50 μ l，再加入显色剂 B50 μ l，轻轻震荡混匀， 37 ℃避光显色15分钟.

10. 终止：每孔加终止 液50μl ，终止反应 （此时蓝色立转黄色） 。

11. 测定：以空白空调零， 4 50 nm波长依序测量各孔的 吸光 度（OD 值） 。 测定应在加终止液后15 分钟以内进行。

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