牛牛天天人人综合影院 RD 人脱氧吡啶酚 500ng 中文说明书

【资料简介】

人 （ Human ） 脱氧吡啶酚 （ DPD ） ELISA 检测试剂盒

本试剂仅供研究使用 标本：血清或血浆

试验原理 ：

DPD 试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ ELISA ） . 已知 DPD 浓度的标准品、未知浓度的样品 加入微孔酶标板内进行检测。先将 DPD 和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的 HRP 。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物 A 、 B ，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中 DPD 的浓度呈比例关系。

试剂盒内容及其配制 ：

试剂盒成份	96 孔配置	48 孔配置
96/48 人份酶标板	1 块板（ 96T ）	半块板（ 48T ）
塑料膜板盖	1 块	半块
标准品： 500ng/ml	1 瓶（ 1.0ml ）	1 瓶（ 0.5ml ）
空白对照	1 瓶（ 1.0ml ）	1 瓶（ 0.5ml ）
标准品稀释缓冲液	1 瓶（ 8.0ml ）	1 瓶（ 4.0ml ）
生物素标记的抗 DPD 抗体	1 瓶（ 8.0ml ）	1 瓶（ 4.0ml ）
亲和链酶素 -HRP	1 瓶（ 12ml ）	1 瓶（ 5ml ）
洗涤缓冲液	1 瓶（ 20ml ）	1 瓶（ 10ml ）
底物 A	1 瓶（ 6.0ml ）	1 瓶（ 3.0ml ）
底物 B	1 瓶（ 6.0ml ）	1 瓶（ 3.0ml ）
终止液	1 瓶（ 6.0ml ）	1 瓶（ 3.0ml ）

自备材料 ：

1. 蒸馏水。

2. 加样器： 5ul 、 10ul 、 50ul 、 100ul 、 200ul 、 500ul 、 1000ul 。

3. 振荡器及磁力搅拌器等。

样品收集、处理及保存方法 ：

1、 血清 ……操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000 × g 离心 10 分钟将血红 细胞迅速小心地分离。

2 、 血浆 ……EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000 × g 离心 30 分钟去除颗粒。

3 、 细胞上清液 ……1000 × g 离心 10 分钟去除颗粒和聚合物。

4 、 组织匀浆 ……将组织加入适量生理盐水捣碎。1000 × g 离心 10 分钟，取上清液。

5 、 保存 ……如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70℃保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

操作注意事项 ：

● 试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。

● 实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。

● 不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。

● 使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物 A 、 B 液时，避免使用带金属部分的加样器。

● 使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。

● 底物 A 应挥发，避免长时间打开盖子。底物 B 对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取 OD 值。

● 加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。

● 按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。

试剂的准备 ：

1. 标准品：标准品的系列稀释应在实验时准备，不能储存。稀释前将标准品振荡混匀。稀释比例按下表中进行：

500 ng/ml	（ 6 号标准品）	原倍浓度不用稀释直接加入 50ul
250 ng/ml	（ 5 号标准品）	100ul 的原倍标准品加入 100ul 的标准品稀释液
125 ng/ml	（ 4 号标准品）	100ul 的 5 号标准品加入 100ul 的标准品稀释液
62.5 ng/ml	（ 3 号标准品）	100ul 的 4 号标准品加入 100ul 的标准品稀释液
31.2 ng/ml	（ 2 号标准品）	100ul 的 3 号标准品加入 100ul 的标准品稀释液
15.6 ng/ml	（ 1 号标准品）	100ul 的 2 号标准品加入 100ul 的标准品稀释液
0 ng/ml	（空白对照）	原倍浓度不用稀释直接加入 50ul

2. 洗涤缓冲液（ 50× ）的稀释：蒸馏水 50 倍稀释。

试剂盒性能 ：

1. 灵敏度：zui小的检测浓度小于 1 号标准品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数 R 值为 0.990 。

2. 特异性：不与其它细胞因子反应。

3. 重复性：板内、板间变异系数均小于 10% 。

操作步骤 ：

1. 使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。

2. 根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。

3. 加入稀释好后的标准品 50 ul 于反应孔、加入待测样品 50 ul 于反应孔内。立即加入 50 ul 的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀， 37 ℃温育45分钟。

4. 甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作4次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。

5. 每孔加入100ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。

6. 甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作4次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。

7. 每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育5分钟。避免光照。

8. 取出酶标板，迅速加入 50 ul 终止液，加入终止液后应立即测定结果。

9. 在 450 nm 波长处测定各孔的 OD 值。

结 果 判 断 与 分 析 ：

1、 仪器值：于波长 450nm 的酶标仪上读取各孔的 OD 值

2、 以吸光度 OD 值为纵坐标（ Y ），相应的 DPD 标准品浓度为横坐标（ X ），做得相应的曲线，样品的 DPD 含量可根据其 OD 值由标准曲线换算出相应的浓度，再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与 OD 值计算出标准曲线的回归方程式，将样品的 OD 值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。

3、 检测值范围： 0-500ng /ml

4、 敏感度： 1.95ng /ml