女人天天干夜夜爽视频 小鼠腺病毒 （ADV）ELISA试剂盒说明书

【资料简介】

小鼠腺病毒 (ADV)ELISA试剂盒说明书

本试剂仅供研究使用 目的：本试剂盒用于测定 小鼠 血清，血浆及相关液体样本中 腺病毒 (ADV)  水平。

实验原理 ：

本试剂盒 采 用双抗 体 夹心 酶联免疫 法 （ELISA） 测定 标本 中 小鼠 腺病毒 (ADV) 。用纯化的 小鼠 腺病毒 (ADV) 抗体 包被微孔板，制成固相抗 体 ， 可与样品中 腺病毒 (ADV) 相结合 ， 经洗涤除去未结合的抗原和其他成分后 再与HRP标记的 腺病毒 (ADV) 抗体 结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物 ，经过*洗涤后 加 底物TMB显色。TMB在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。用酶标仪在 450 nm波长下测定吸光度（OD值） ，与CUTOFF值相比较，从而判定标本中 小鼠 腺病毒 (ADV) 的存在与否。

试剂盒组成 ：

试剂盒组成	48孔配置	96孔配置	保存
说明书	1份	1份
封板膜	2片（48）	2片（96）
密封袋	1个	1个
酶标包被板	1 ×48	1 ×96	2-8℃保存
阴性对照	0.5ml×1瓶	0.5ml×1瓶	2-8℃保存
阳性对照	0.5ml×1瓶	0.5ml×1瓶	2-8℃保存
酶标试剂	3 ml×1瓶	6 ml×1瓶	2-8℃保存
样品稀释液	3 ml×1瓶	6 ml×1瓶	2-8℃保存
显色剂A液	3 ml×1瓶	6 ml×1瓶	2-8℃保存
显色剂B液	3 ml×1瓶	6 ml×1瓶	2-8℃保存
终止液	3ml×1瓶	6ml×1瓶	2-8℃保存
浓缩洗涤液	（20ml×20倍）×1瓶	（20ml×30倍）×1瓶	2-8℃保存

样本处理及要求 ：

1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。

2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。

3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。

4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

5. 组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。

6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可 将标本放于 -20 ℃保存，但 应 避免反复冻融 .

7. 不能检测含NaN3的样品 ，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

操作步骤 ：

1. 编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照2 孔、 阳性对照2孔、空白对照1孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）
2. 加样：分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照50 μl 。然后在 待测样品孔 先加样品稀释液40 μl ，然后再加待测样品10 μl 。 加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁， 轻轻 晃动 混匀，
3. 温育：用封板膜封板后置37 ℃温育3 0 分钟 。
4. 配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液加蒸馏水至600ml后备用
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体， 甩干 ，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂50 μl ，空白孔除外 。
7. 温育：操作同3。
8. 洗涤：操作同5。
9. 显色：每孔先加入显色剂A 50 μl ，再加入显色剂B 50 μl ，轻轻震荡混匀，37 ℃避光显色15分钟
10. 终止：每孔加终止 液50μl，终止反应 （此时蓝色立转黄色） 。
11. 测定：以空白空调零， 4 50 nm波长依序测量各孔的 吸光 度（OD值） 。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

结果判定：

 试验有效性：阳性对照孔平均值 ≥ 1.00; 阴性对照平均值 ≤ 0.10

  临界值（CUT OFF）计算：临界值 = 阴性对照孔平均值+0.15

  阴性判定：样品OD值 <  临界值（CUT OFF）者为 腺病毒 (ADV) 阴性

  阳性判定：样品OD值 ≥  临界值（CUT OFF）者为 腺病毒 (ADV) 阳性

注意事项

1．操作严格按照说明书进行，本试剂不同批号组分不得混用。

2．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

3． 浓洗涤液 可能 会有 结晶 析出，稀释时可在水浴中加温助溶 ，洗涤时不影响结果。

1. 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

5．底物请避光保存。

6．试验结果判定必须以酶标仪读数为准，使用双波长检测时，参考波长为630nm

7．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。终止液为2M的硫酸，使用时必须注意安全。

保存条件及有效期

1． 试剂盒保存： ；2-8 ℃ 。

2．有效期：6个月