牛牛天天人人综合影院 植物异柠檬酸脱氢酶（ICD）ELISA试剂盒说明书

【资料简介】

植物异柠檬酸脱氢酶(ICD)ELISA试剂盒说明书

本试剂仅供研究使用 目的：本试剂盒用于测定植物组织，细胞及其它相关样本中 植物 异柠檬酸脱氢酶 ( ICD ) 活性。

实验原理 ：

本试剂盒应用双抗体夹心法测定 标本 中 植物 异柠檬酸脱氢酶 ( ICD ) 水平。用纯化的 植物 异柠檬酸脱氢酶 ( ICD ) 抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入 植物 异柠檬酸脱氢酶 ( ICD ) ，再与HRP标记的 异柠檬酸脱氢酶 ( ICD ) 抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物 ，经过*洗涤后 加 底物TMB显色。TMB在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的 异柠檬酸脱氢酶 ( ICD ) 呈正相关。用酶标仪在 450 nm波长下测定吸光度（OD值）， 通过标准曲线 计算样品 中 植物 异柠檬酸脱氢酶 ( ICD ) 活性 。

试剂盒组成 ：

试剂盒组成	48孔配置	96孔配置	保存
说明书	1份	1份
封板膜	2片（48）	2片（96）
密封袋	1个	1个
酶标包被板	1 ×48	1 ×96	2-8℃保存
标准品： 270 U/L	0.5ml×1瓶	0.5ml×1瓶	2-8℃保存
标准品稀释液	1.5ml×1瓶	1.5ml×1瓶	2-8℃保存
酶标试剂	3 ml×1瓶	6 ml×1瓶	2-8℃保存
样品稀释液	3 ml×1瓶	6 ml×1瓶	2-8℃保存
显色剂A液	3 ml×1瓶	6 ml×1瓶	2-8℃保存
显色剂B液	3 ml×1瓶	6 ml×1瓶	2-8℃保存
终止液	3ml×1瓶	6ml×1瓶	2-8℃保存
浓缩洗涤液	（20ml×20倍）×1瓶	（20ml×30倍）×1瓶	2-8℃保存

标本要求：

1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可 将标本放于 -20 ℃保存，但 应 避免反复冻融

2．不能检测含NaN3的样品 ，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

操作步骤：

1. 标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在*、第二孔中分别加标准品100 μ l，然后在*、第二孔中加标准品稀释液50 μ l，混匀；然后从*孔、第二孔中各取100 μ l分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50 μ l，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50 μ l弃掉，再各取50 μ l分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50 μ l分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50 μ l，混匀后从第七、第八孔中分别取50 μ l加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50 μ l，混匀后从第九第十孔中各取50 μ l弃掉。（稀释后各孔加样量都为50 μ l， 活性 分别为 180  U/L ， 12 0  U/L ， 6 0  U/L ， 3 0  U/L ， 15  U/L）。
2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、 待测样品孔 。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40 μ l，然后再加待测样品10 μ l（样品zui终稀释度为5倍）。 加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁， 轻轻 晃动 混匀 。
3. 温育：用封板膜封板后置37 ℃温育3 0 分钟 。
4. 配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用。
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体， 甩干 ，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂50 μ l，空白孔除外 。
7. 温育：操作同3。
8. 洗涤：操作同5。
9. 显色：每孔先加入显色剂A50 μ l，再加入显色剂B50 μ l，轻轻震荡混匀，37 ℃避光显色15分钟.
10. 终止：每孔加终止 液50μl，终止反应 （此时蓝色立转黄色） 。
11. 测定：以空白空调零， 4 50 nm波长依序测量各孔的 吸光 度（OD值） 。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

注意事项：

1. 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2. 浓洗涤液 可能 会有 结晶 析出，稀释时可在水浴中加温助溶 ，洗涤时不影响结果。
3. 各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4. 请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔*孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请zui后 乘以 总稀释倍数（ ×n×5 ）。
5. 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6. 底物请避光保存。
7. 严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8. 所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9. 本试剂不同批号组分不得混用。

10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。

计算 ：

以标准物的 活性 为横坐标，OD值为纵坐标，

在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD

值由标准曲线查出相应的 活性 ；再乘以 稀释

倍数 ；或用标准物的 活性 与OD值计算出标

准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值

代入方程式，计算出样品 活性 ，再乘以 稀释

倍数 ，即为样品的实际 活性 。

（此图仅供参考）

试剂盒性能：

1.样品线性回归与预期 活性 相关系数R值为0.92以上。

2.批内与批见应分别小于9%和15%

保存条件及有效期：

1.试剂盒保存： ；2-8 ℃ 。

2．有效期：6个月