牛牛天天人人综合影院 大鼠CD63酶联免疫试剂盒分析

【资料简介】

牛牛天天人人综合影院 大鼠CD63酶联免疫试剂盒分析

本试剂盒仅供研究使用。

检测范围：                                                          96T

ng/L -40 ng/L

使用目的：

本 试剂盒 用于测定 大鼠血清、血浆及相关液体样本中CD63 含量。

实验原理

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠CD63水平。用纯化的大鼠CD63抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入CD63，再与HRP标记的CD63抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的CD63呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中大鼠CD63浓度。

试剂盒组成

	30倍浓缩洗涤液	20ml×瓶	7	终止液	6ml×瓶
2	酶标试剂	6ml×瓶	8	标准品（80ng/L）	0.5ml×瓶
3	酶标包被板	2孔×8条	9	标准品稀释液	.5ml×瓶
4	样品稀释液	6ml×瓶	0	说明书	份
5	显色剂A液	6ml×瓶		封板膜	2张
6	显色剂B液	6ml×/瓶	2	密封袋	个

试剂盒 标本要求

．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融

2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

试剂盒 操作步骤

.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

40 ng/L	5号标准品	50μl的原倍标准品加入50μl标准品稀释液
20 ng/L	4号标准品	50μl的5号标准品加入50μl标准品稀释液
0 ng/L	3号标准品	50μl的4号标准品加入50μl标准品稀释液
5 ng/L	2号标准品	50μl的3号标准品加入50μl标准品稀释液
2.5 ng/L	号标准品	50μl的2号标准品加入50μl标准品稀释液

2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品0μl（样品zui终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

4.配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用

5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

7.温育：操作同3。

8.洗涤：操作同5。

9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色5分钟.

0.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后5分钟以内进行。

试剂盒 操作程序总结：

计算

  以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。

注意事项

．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡5-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内，如标本数量多，使用排枪加样。

4． 请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔*孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请zui后乘以总稀释倍数（×n×5）。

5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物请避光保存。

7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9．本试剂不同批号组分不得混用。

0. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。

保存条件及有效期

．试剂盒保存：；2-8℃。

2．有效期：6个月