牛牛天天人人综合影院 组蛋白乙酰转移酶MOF抗体免疫组化试剂盒使用说明书

【资料简介】

组蛋白乙酰转移酶MOF抗体

免疫组化试剂盒使用说明书

保存方法： 2-8 ℃保存。 有效期： 一年。 生产日期： 见封口。

工作原理：

辣根过氧化物酶（ HRP ）的分子量（ 40000 ），它不会遮盖抗原的结合部位，具有较高活性及特异性，可溶性佳，生成的产物不扩散，可作用于多种底物，产生不同颜色且 HRP 穿透力强，易进入细胞内。 DAB 在 H2O2 存在的情况下，可以作为 HRP 的电子供体，产生褐色的不溶颗粒，可作为显色的试剂。

试剂盒内容：

	名称	规格
1	0.01mol/L pH6.0枸橼酸盐缓冲液	0.5L
2	PBS缓冲液	1L
3	广谱二抗	1.5mL
4	30%H2O 2	5mL
5	DAB显色液I	0.3mL
6	DAB显色液II	0.3mL

自备试剂：无水乙醇、苏木素。

操作步骤操作步骤 ：

1.  60℃ 常规 脱蜡 至水 后 ， 将石蜡切片先后浸入二甲苯 Ⅰ ，二甲苯 Ⅱ 各 10min 。然后逐级降浓度酒精入水，每次 3-5 min 。

①	*	3 － 5min
②	90% 酒精	3 － 5min
③	85% 酒精	3 － 5min
④	75% 酒精	3 － 5min
⑤	PBS 洗涤 3 次	每次 5 min

1. 热修复抗原： 将切片置于 0.01mol/L pH6.0 枸橼钠 缓冲液，微波炉加热至沸腾后断电，间隔 5 - 10 min 后，反复 1-2 次，置于室温自然冷却。 0.01 mol/L  pH 7 . 0 左右 的 PBS 洗涤 3 次，每次 5 min

消除内源性过氧化物酶： 用 3% H  2 O  2 室温孵育  5-10 min ，以消除内源性过氧化物酶的活性。 PBS 洗涤 2-3 次，每次 5 min ；

4. 滴加一抗： 滴加 适当稀释的一抗到 切片上， 37 ℃ 孵育 一定时间 或者 4 ℃ 过夜，  pH7.4 的 PBS 洗涤 3 次，每次 5 min 。（一抗的稀释度、孵育时间和温度与染色强度、背景有直接关系。一般来说，阳性染色强度不够时，可提高一抗浓度和延长孵育时间；背景过高时，可降低一抗浓度和缩短孵育时间。）

1. 加入 广谱二抗 ，37℃孵育 一段时间 ， 取出后 PBS 洗涤 3 次，每次 5 min 。

6. DAB显色： 取 DAB 显色液 I及II各50微升 加至 入1mL的水中，配成DAB工作液，滴加到 切片 上 ，室温显色 ， 镜下控制反应时间。若无背景出现则可继续显色。蒸馏水充分洗涤以终止反应。

. 观察显色后自来水冲，苏木精复染1-2min，，自来水冲10min，梯度酒精脱水，二甲苯透明， 中性树胶 封片，干燥，分析拍照