女人天天干夜夜爽视频 细胞氧化应激活性氧羟自由基比色法定量检测试剂盒产品说明书

【资料简介】

细胞氧化应激活性氧羟自由基比色法定量检测试剂盒 产品说明书（中文版）

主要用途

细胞氧化应激活性氧羟自由基比色法定量检测试剂 是一种旨在通过捕获剂二甲基亚砜， 受到 羟自由基 的氧化 ，进而与偶氮染料反应，产生 黄色 产物 ，由分光光度仪比色分析 未反应棕色成分 ， 来 定量检测细胞内 羟自由基 活性氧族的生成和增加 的而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。适用于各种细胞（动物、人体等）裂解悬液或培养上清的羟自由基检测，以及羟自由基激发剂和抗氧化清除剂（scanvenger）等的检测。可以被用于细胞凋亡、信号传递、衰老、代谢和营养学等的研究。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，显色清晰。

技术背景

超氧自由基阴离子（superoxide radical；O 2- ）、过氧化氢（hydrogen peroxide；H 2 O 2 ）、羟自由基或氢氧基 （hydroxyl radical；OH - ）、 过氧化基（peroxyl radical；ROO - ）、 氢过氧自由基（hydroperoxyl；HOO）、烷氧自由基（ alcoxyl radical）、 氮氧基（nitric Oxide；NO - ） 、过氧亚硝基阴离子（ peroxynitrite anion；ONOO - ） 次氯酸（ hypochlorous acid；HClO）、 半醌自由基 （semiquinone radical）、 单线态氧气（singlet oxygen）等细胞内活性氧族（Reactive Oxygen Species；ROS）的产生和增多，将导致细胞衰老或凋亡。其中 羟自由基或氢氧基具有极度反应性和毒性，同时半衰期短（10 －9 至10 －10 秒）。其产生主要是水分子受到高能量放射后裂解、过氧化物和次氯酸反应、过氧化氢的还原、超氧化物的歧化等形成。使用 二甲基亚砜（dimethy sulfoxide；DMSO），作为羟自由基的分子探针，捕获羟自由基，并被氧化为 甲基亚磺酸（methane sulfinic acid；MSA），在偶氮染料（diazonium dye）的作用下，产生黄色产物偶氮 亚砜（diazosulfone），通过分光光度仪（ 325 nm波长）， 检测 未反应棕色成分，以 测定羟自由基的含量。据此证明细 胞 内活性氧族的存在。其反应系统为：

产品内容

清理液（Reagent A）    毫升

标记液（Reagent B）    微升

酸性液（Reagent C） 微 升

染色液（Reagent D）    瓶

终止液（Reagent E）    毫升

萃取液（Reagent F）    毫升

标准液（Reagent G ）  毫 升

产品说明书 1份

保存方式

保存染色液（Reagent D） 和 标准液（Reagent G ）在－20 ℃ 冰箱里，避免光照；其余的保存在4 ℃ 冰箱里 ； 酸性液（Reagent C）具有腐蚀性，注意操作安全；终止液（Reagent E） 和萃取液（Reagent F）容易挥发， 注意密闭；染色液（Reagent D） 避免光照； 有效保证6月

用户自备

1.5毫升离心管：用于标准液配制的容器

2 毫升离心管：用于样品操作的容器

细胞刮脱棒：用于贴壁细胞脱离

DOUNCE匀浆器：用于细胞裂解

台式离心机：用于样品制备和反应处理

石英或玻璃比色皿：用于比色分析的容器

分光光度仪：用于 比色分析

实验步骤

一、样品准备

选择一：培养细胞

• 准备好25cm 2 细胞培养瓶或60mm细胞培养皿的待测培养细胞（1至5 X 10 6 细胞）
• 小心抽去培养液
• 小心加入 xx 毫升 清理液（Reagent A） ，覆盖生长表面
• 小心抽去清理液
• 使用细胞刮脱棒轻柔刮脱细胞（注意： 避免使用胰酶消化 ）
• 加入 xx 毫升 清理液（Reagent A） ，混匀细胞
• 移入到预冷的15毫升锥形离心管（注意： 悬浮细胞从这一步骤开始 ）
• 放进4℃台式离心机离心5分钟，速度为300g
• 小心抽去上清液
• 加入 xx 毫升 清理液（Reagent A）
• 强力涡旋震荡15秒
• 即刻放入 预冷的 DOUNCE匀浆器
• 在冰槽里用研磨棒匀化 细胞 （约80下）
• 将所有 细胞 匀浆物移入15毫升锥形离心管
• 放进4℃台式离心机离心5分钟，速度为10000g
• 小心移取3毫升上清液到新的预冷的15毫升锥形离心管
• 移取10微升进行蛋白定量检测（注意： 建议使用 Bradford蛋白质浓度定量试剂盒－GMS30030.1 ）
• 即刻放进－70℃保存或置于冰槽里继续后续操作

选择二：细胞培养液

• 移取3毫升细胞培养液到15毫升锥形离心管
• 放进台式离心机离心5分钟，速度为10000g
• 小心移取3毫升上清液到新的预冷的15毫升锥形离心管
• 即刻放进－70℃保存或置于冰槽里继续后续操作

二、标准样品配制

• 准备好5个1.5毫升离心管，标记为1至5号管
• 分别加入 xx 微升 清理液（Reagent A） 到2至5号管
• 移取 xx 微升 标准液（Reagent G ） 到1号管
• 小心移取 xx 微升1号管的 标准液（Reagent G ） 到2号管，混匀
• 小心移取 xx 微升2号管稀释的 标准液（Reagent G ） 到3号管，混匀
• 小心移取 xx 微升3号管稀释的 标准液（Reagent G ） 到4号管，混匀
• 将1至5号管放进冰槽里备用，避免光照；标准管浓度见下表

管号	清理液（Reagent A）	标准液（Reagent G ）	测定体系 标准 MSA 浓度
1	－	xx 微升	xx微 摩尔/升
2	xx 微升	xx 微升1号管	xx微 摩尔/升
3	xx 微升	xx 微升2号管	xx微 摩尔/升
4	xx 微升	xx 微升3号管	xx微 摩尔/升
5	xx 微升	0	0

• 标准曲线测定

实验开始前，将－ 20 ℃冰箱里的试剂盒中的 染色 液（Reagent D） 置入 室温下 ，然后移出 xx毫升 清理液（Reagent A） 到 染色 液（Reagent D） 瓶里，混匀后，标记为 染色工作液 ，使用锡箔纸包裹避光， 置于冰槽里 备用（注意：可以使用12次） 。 放在暗室里备用 。然后进行下列操作

• 移取 xx微 升上述配制的 标准液（Reagent G ） 到 2 毫升离心管
• 加入 xx 微升 酸性液（Reagent C）
• 加入 xx 微升 染色 工作液 ，手动混匀
• 室温下孵育10分钟，避免光照
• 加入 xx微 升 终止液（Reagent E） ，手动混匀
• 加入xx毫升 萃取液（ Reagent  F） ，手动混匀
• 小心移取 1毫 升上层 浅棕色 液相到新的 比色皿
• 即刻 （3分钟内） 放进分光光度仪 （325nm波长） 检测：获得吸光读数
• 重复实验步骤1至 8 四次
• 构建标准曲线：纵座标（Y轴）为吸光读数；横座标（X轴）为标准 MSA 浓度（ 微 摩尔/升）

• 样品测定

• 移取2 00微 升待测样品到 2 毫升离心管
• 加入 xx 微升 标记液（Reagent B）
• 涡旋震荡5秒
• 室温下孵育30分钟
• 加入 xx 微升 酸性液（Reagent C）
• 加入 xx 微升 染色 工作液 ，手动混匀
• 室温下孵育10分钟，避免光照
• 加入 xx微 升 终止液（Reagent E） ，手动混匀
• 加入xx毫升 萃取液（ Reagent  F） ，手动混匀
• 小心移取 1毫 升上层 浅棕色 液相到新的 比色皿
• 即刻 （3分钟内） 放进分光光度仪 （325nm波长） 检测：获得吸光读数
• 根据标准曲线获得样品对应MSA浓度，即羟自由基浓度 （ 微 摩尔/升）
• 计算样品实际MSA浓度，即羟自由基浓度 （ 微 摩尔/升）

• 或构建细胞内活性氧生成曲线： 纵座标（Y轴）为羟自由基活性氧吸光值（OD）；横坐标（X轴）为 组织量 、蛋白量、时间点或药物处理浓度等

注意事项

• 本产品为20次操作
• 操作时，须戴手套
• 酸性液（Reagent C） 具有腐蚀性，注意操作安全
• 终止液（Reagent E） 和 萃取液（Reagent F） 容易挥发， 注意密闭
• 建议 染色工作液 现配现用为佳
• 孵育时，必须避免光照
• 建议使用新鲜样品
• 建议使用石英或玻璃比色皿
• 本产品适合抗氧化能力检测
• 用户可以使用320至360nm之间的任一波长进行检测
• 如果读数大于1.5，可以使用 萃取 液（Reagent F ） 予以稀释，但注意计算公式的稀释倍数变化
• 本公司提供系列氧化应急活性氧检测试剂产品

质量标准

• 本产品经鉴定性能稳定
• 本产品经鉴定检测敏感

使用承诺

杰美基因秉着“信誉、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。

单组分订购信息

编号 名称 规格

GMS10124.3 细胞氧化应激活性氧羟自由基比色法定量检测试剂盒 20次

GMS10124. 3 A 清理液（Reagent A） 毫升

GMS10124. 3 B 标记液（Reagent B） 毫升

GMS10124. 3 C 酸性液（Reagent C） 毫升

GMS10124. 3 D 染色液（Reagent D） 瓶

GMS10124. 3E 终止液（Reagent E） 毫升

GMS10124. 3F 萃取 液（Reagent F ） 毫升

GMS10124. 3G 标准液（Reagent G ） 毫升