牛牛天天人人综合影院 兔子胶原酶II（Collagenase II）试剂盒免疫分析

【资料简介】

牛牛天天人人综合影院 兔子胶原酶II（Collagenase II）试剂盒免疫分析

实验原理：
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中 兔子胶原酶 Collagenase II 水平。用纯化的兔子胶原酶 II（Collagenase II） 抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入胶原酶 II（Collagenase II） ，再与 HRP 标记的胶原酶 II（Collagenase II） 抗体结合，形成抗体 - 抗原 - 酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物 TMB 显色。 TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的胶原酶 II（Collagenase II） 呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（ OD 值），通过标准曲线计算样品中兔子胶原酶 II（Collagenase II） 浓度。

注意事项：

．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡5-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内，如标本数量多，使用排枪加样。

4．请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔*孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请zui后乘以总稀释倍数（ ×n×5 ）。

5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物请避光保存。

7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9．本试剂不同批号组分不得混用。

0.如与英文说明书有异，以英文说明书为准。

操作步骤

. 标准品的稀释与加样：兔子胶原酶 Collagenase II 在酶标包被板上设标准品孔0孔，在*、第二孔中分别加标准品00μl，然后在*、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从*孔、第二孔中各取00μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为800ng/L，200ng/L，600ng/L，300ng/L， 50ng/L ）。

2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、 待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品0μl（样品zui终稀释度为5倍）。 加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3.温育：用封板膜封板后置37℃ 温育30分钟。

4.配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用。

5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

7.温育：操作同3。

8.洗涤：操作同5。

9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃ 避光显色5分钟.

0.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后5分钟以内进行。

样本处理及要求：

.血清：室温血液自然凝固0-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。

2.血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合0-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。

3.尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。

4.细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到00万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

5.组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃ 的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。

6. 兔子胶原酶 Collagenase II 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃ 保存，但 应避免反复冻融.

7.不能检测含NaN3的样品 ，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。