男女呻吟久久免费视频 猴（Monkey）免疫球蛋白G（IgG）ELISA检测试剂盒

【资料简介】

本 试剂仅 供 研 究使用 标 本：血 清 或血 浆

试验 原理 ：

IgG 试剂 盒是固相 夹 心法酶 联 免疫吸附 实验 （ ELISA ） . 已知 IgG 浓 度的 标 准品、未知 浓 度的 样 品加入微孔酶 标 板 内进 行 检测 。先 将 IgG 和* 标记 的抗体同 时温 育。洗 涤 后，加入 亲 和素 标记过 的 HRP 。再 经过温 育和洗 涤 ，去除未 结 合的酶 结 合物，然后加入底物 A 、 B ，和酶 结 合物同 时 作用。 产 生 颜 色。 颜 色的深 浅 和 样 品中 IgG 的 浓 度呈比例 关系。

样品收集、处理及保存方法

1. 血清 ----- 操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后， 1000 × g 离心 10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆 -----EDTA 、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。 1000 × g 离心 30 分钟去除颗粒。
3. 细胞上清液 ---1000 × g 离心 10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆 ----- 将组织加入适量生理盐水捣碎。 1000 × g 离心 10 分钟，取上清液
5. 保存 ------ 如果样品不立即使用，应将其分成小部分 -70 ℃保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在 37 ℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

试剂的准备

1. 标准品：标准品的系列稀释应在实验时准备，不能储存。稀释前将标准品振荡混匀。稀释比例按下表中进行：

80 g /L	（ 6 号标准品）	原倍浓度不用稀释直接加入 50ul 。
40 g /L	（ 5 号标准品）	100ul 的原倍标准品加入 100ul 的标准品稀释液
20 g /L	（ 4 号标准品）	100ul 的 5 号标准品加入 100ul 的标准品稀释液
10 g /L	（ 3 号标准品）	100ul 的 4 号标准品加入 100ul 的标准品稀释液
5.0 g /L	（ 2 号标准品）	100ul 的 3 号标准品加入 100ul 的标准品稀释液
2.5 g /L	（ 1 号标准品）	100ul 的 2 号标准品加入 100ul 的标准品稀释液
0 g /L	（空白对照）	原始浓度不用稀释直接加入 50ul 。

1. 洗涤缓冲液（ 50 ×）的稀释：蒸馏水 50 倍稀释。

操作步骤

1. 使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。
2. 根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液 1 ： 1 稀释后加入 50ul 于反应孔内。
3. 加入稀释好后的标准品 50ul 于反应孔、加入待测样品 50ul 于反应孔内。立即加入 50ul 的*标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀， 37 ℃温育 1 小时。
4. 甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡 30 秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作 3 次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
5. 每孔加入 80ul 的亲和链酶素 -HRP ，轻轻振荡混匀， 37 ℃温育 30 分钟。
6. 甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡 30 秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作 3 次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
7. 每孔加入底物 A 、 B 各 50ul ，轻轻振荡混匀， 37 ℃温育 10 分钟。避免光照。
8. 取出酶标板，迅速加入 50ul 终止液，加入终止液后应立即测定结果。
9. 在 450nm 波长处测定各孔的 OD 值。

建议使用的实验方案

标准品浓度（ g/L ）

A

80

80

样品

样品

样品

样品

样品

样品

样品

样品

样品

样品

B

40

40

样品

样品

样品

样品

样品

样品

样品

样品

样品

样品

C

20

20

样品

样品

样品

样品

样品

样品

样品

样品

样品

样品

D

10

10

样品

样品

样品

样品

样品

样品

样品

样品

样品

样品

E

5.0

5.0

样品

样品

样品

样品

样品

样品

样品

样品

样品

样品

F

2.5

2.5

样品

样品

样品

样品

样品

样品

样品

样品

样品

样品

G

0

0

样品

样品

样品

样品

样品

样品

样品

样品

样品

样品

H

样品

样品

样品

样品

样品

样品

样品

样品

样品

样品

样品

样品

局限

6 号标准品以上的结果为非线性的，根据此标准曲线无法得到的结果。

试剂盒性能

1. 灵敏度：zui小的检测浓度小于 1 号标准品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数 R 值为 0.990 。

2. 特异性：不与其它细胞因子反应。

3. 重复性：板内、板间变异系数均小于 10% 。

结 果 判 断 与 分 析

1 、仪器值：于波长 450nm 的酶标仪上读取各孔的 OD 值

2 、以吸光度 OD 值为纵坐标（ Y ），相应的 IgG 标准品浓度为横坐标（ X ），做得相应的曲线，样品的 IgG 含量可根据其 OD 值由标准曲线换算出相应的浓度。

3 、 检测值范围： 0-80g/L

4 、敏感度： 0.1 g/L