牛牛天天人人综合影院 上海信帆：大鼠P物质（SP）操作说明和操作步骤

【资料简介】

大鼠P物质(SP) 酶联免疫分析 试剂盒使用说明书

使用目的：

本试剂盒用于测定大鼠 血清 , 血浆 , 组织 及相关液体 样本中 P物质(SP) 含量。

实验原理

本试 剂 盒 应 用 双 抗 体 夹 心 法测 定 标 本 中 大 鼠 P物质(SP) 水平 。 用 纯 化的 大 鼠 P物质(SP) 抗 体包 被 微 孔 板 ， 制 成 固 相 抗 体 ， 往 包 被 单 抗 的 微 孔 中依 次 加 入 P物质(SP) ，再与 HRP 标记的 P物质(SP) 抗体结合，形成抗体 - 抗原 - 酶标 抗体复合物，经过*洗涤后加底物 TMB 显色。 TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的 P物质(SP) 呈正相关。 用酶 标 仪在 4 50nm 波长 下 测定 吸 光 度（ O D 值 ） ， 通 过标 准 曲 线 计 算 样 品 中 大 鼠 P物质(SP) 浓度。

试剂盒组成

1	30 倍浓缩洗涤液	20ml × 1 瓶	7	终止液	6ml × 1 瓶
2	酶标试剂	6ml × 1 瓶	8	标准品（ 480 ng/ L ）	0.5ml × 1 瓶
3	酶标包被板	12 孔× 8 条	9	标准品稀释液	1.5ml × 1 瓶
4	样品稀释液	6ml × 1 瓶	10	说明书	1 份
5	显色剂 A 液	6ml × 1 瓶	11	封板膜	2 张
6	显色剂 B 液	6ml × 1/ 瓶	12	密封袋	1 个

标本要求

1 ．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能 马上进行试验，可将标本放于 -20 ℃保存，但应避免反复冻融

2．不能检测含 NaN3 的样品，因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（ HRP ）活性。

操作步骤

1. 标准 品 的 稀 释 ： 本 试 剂 盒 提供 原 倍 标 准 品 一 支 ， 用 户可 按 照 下 列 图 表 在 小 试 管中 进 行稀 释。

240 ng/ L	5 号标准品	150 μ l 的原倍标准品加入 150 μ l 标准品稀释液
120 ng/ L	4 号标准品	150 μ l 的 5 号标准品加入 150 μ l 标准品稀释液
60 ng/ L	3 号标准品	150 μ l 的 4 号标准品加入 150 μ l 标准品稀释液
30 ng/ L	2 号标准品	150 μ l 的 3 号标准品加入 150 μ l 标准品稀释液
15 ng/ L	1 号标准品	150 μ l 的 2 号标准品加入 150 μ l 标准品稀释液

2. 加样 ： 分 别 设 空 白 孔 （ 空 白对 照 孔 不 加 样 品 及 酶 标 试 剂 ， 其 余 各 步 操 作 相 同 ） 、 标 准 孔、 待测 样 品 孔 。 在 酶 标 包 被板 上 标 准 品 准 确 加 样 50 μl ， 待 测样 品 孔 中 先 加 样 品 稀 释 液 40 μl ， 然后 再 加 待 测 样 品 1 0 μl （ 样品 zui 终 稀 释 度 为 5 倍 ） 。 加样 将 样 品 加 于 酶 标 板 孔 底 部 ，尽 量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3. 温育：用封板膜封板后置 37 ℃温育 3 0 分钟。

4. 配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用

5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此

重复 5 次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶标试剂 50 μ l ，空白孔除外。

7. 温育：操作同 3 。

8. 洗涤：操作同 5 。

9. 显色：每孔先加入显色剂 A50 μ l ，再加入显色剂 B50 μ l ，轻轻震荡混匀， 37 ℃避光显色

15 分钟.

10. 终止 ： 每 孔 加 终止 液 50 μ l ，终 止 反 应 （ 此 时 蓝 色 立 转黄 色 ） 。

11. 测定 ： 以 空 白 空 调 零 ， 45 0 nm 波长依 序 测 量 各 孔 的 吸 光 度 （ O D 值 ） 。 测 定 应 在 加终止 液后 15 分钟以内进行。

计算

以标准物的浓度为横坐标， OD 值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的

OD 值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与 OD 值计算出标

准曲 线 的 直 线 回 归 方 程 式 ， 将 样品 的 O D 值 代 入 方程 式 ， 计 算 出 样 品 浓 度 ， 再乘 以 稀 释 倍 数 ， 即为样品的实际浓度。

注意事项

1 ．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未 用完，板条应装入密封袋中保存。

2 ．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

3 ．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间 控制在 5 分钟内，如标本数量多，使用排枪加样。

4 ． 请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本 OD 值 大于 标 准 品 孔 第 一 孔 的 O D 值 ） ， 请 先 用 样 品 稀 释液 稀释 一 定 倍 数 （ n 倍 ） 后 再 测定 ， 计 算时 请 zui 后 乘 以 总 稀 释 倍 数 （ × n× 5 ） 。

5 ． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6 ．底物请避光保存。

7 ．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准 .

8 ．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9 ．本试剂不同批号组分不得混用。

保存条件及有效期

1 ． 试 剂 盒 保 存 ： 2 - 8 ℃

2 ．有效期： 6 个月

上海信帆代理销售大鼠P物质检测试剂盒，现货供应。试剂盒灵敏度高，提供技术指导，咨询。