牛牛天天人人综合影院 植物萘乙酸（NAA）ELISA 检测试剂盒

【资料简介】

试验原理 ：

NAA试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ ELISA ） . 已知 NAA 浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将 NAA 和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的 HRP 。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物 A 、 B ，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中 NAA 的浓度呈比例关系。

试剂盒内容及其配制

试剂盒成份（2-8 ℃保存）	96孔配置	48孔配置	配制
96/48人份酶标板	1块板（ 96T ）	半块板（48T ）	即用型
塑料膜板盖	1块	半块	即用型
标准品：40nmol/L	1瓶（ 0.6ml ）	1瓶（ 0.3ml ）	按说明书进行稀稀
空白对照	1瓶（ 1.0ml ）	1瓶（ 0.5ml ）	即用型
标准品稀释缓冲液	1 瓶（ 5ml ）	1 瓶（ 2.5ml ）	即用型
生物素标记的抗NAA 抗体	1 瓶（ 6ml ）	1 瓶（ 3.0ml ）	即用型
亲和链酶素-HRP	1瓶（ 10ml ）	1瓶（ 5.0ml ）	即用型
洗涤缓冲液	1瓶（ 20ml ）	1瓶（ 10ml ）	按说明书进行稀释
底物A	1瓶（ 6.0ml ）	1瓶（ 3.0ml ）	即用型
底物B	1瓶（ 6.0ml ）	1瓶（ 3.0ml ）	即用型
终止液	1瓶（ 6.0ml ）	1瓶（ 3.0ml ）	即用型
标本稀释液	1瓶（ 12ml ）	1瓶（ 6.0ml ）	即用型

自备材料

1． 蒸馏水。

2． 加样器：5ul 、 10ul 、 50ul 、 100ul 、 200ul 、 500ul 、 1000ul 。

3． 振荡器及磁力搅拌器等。

安全性

1． 避免直接接触终止液和底物A 、 B 。一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。

2． 实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。

3． 不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。

操作注意事项

1． 试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。

2． 实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。

3． 不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。

4． 使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A 、 B 液时，避免使用带金属部分的加样器。

5． 使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。

6． 洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。

7． 底物A 应挥发，避免长时间打开盖子。底物 B 对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取 OD 值。

8． 加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。

9． 按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。

样品收集、处理及保存方法

1、 血清----- 操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后， 1000 × g 离心 10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

2、 血浆-----EDTA 、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。 1000 × g 离心 30 分钟去除颗粒。

3、 细胞上清液---1000 × g 离心 10 分钟去除颗粒和聚合物。

4、 组织匀浆----- 将组织加入适量生理盐水捣碎。 1000 × g 离心 10 分钟，取上清液

5、 保存------ 如果样品不立即使用，应将其分成小部分 -70 ℃保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在 37 ℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

试剂的准备

1． 标准品：标准品的系列稀释应在实验时准备，不能储存。稀释前将标准品振荡混匀。稀释比例按下表中进行：

40 nmol/L	（6 号标准品）	原倍浓度不用稀释直接加入50ul 。
20 nmol/L	（5 号标准品）	100ul的原倍标准品加入 100ul 的标准品稀释液
10 nmol/L	（4 号标准品）	100ul的 5 号标准品加入 100ul 的标准品稀释液
5.0 nmol/L	（3 号标准品）	100ul的 4 号标准品加入 100ul 的标准品稀释液
2.5 nmol/L	（2 号标准品）	100ul的 3 号标准品加入 100ul 的标准品稀释液
1.25 nmol/L	（1 号标准品）	100ul的 2 号标准品加入 100ul 的标准品稀释液
0 nmol/L	（空白对照）	原始浓度不用稀释直接加入50ul 。

2． 洗涤缓冲液（50 ×）的稀释：蒸馏水 50 倍稀释。

操作步骤

1． 使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。

2． 根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液1 ： 1 稀释后加入 50ul 于反应孔内。

3． 加入稀释好后的标准品50ul 于反应孔、加入待测样品 50ul 于反应孔内。立即加入 50ul 的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀， 37 ℃温育 1 小时。

4． 甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30 秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作 3 次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。

5． 每孔加入80ul 的亲和链酶素 -HRP ，轻轻振荡混匀， 37 ℃温育 30 分钟。

6． 甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30 秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作 3 次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。

7． 每孔加入底物A 、 B 各 50ul ，轻轻振荡混匀， 37 ℃温育 10 分钟。避免光照。

8． 取出酶标板，迅速加入50ul 终止液，加入终止液后应立即测定结果。

9． 在450nm 波长处测定各孔的 OD 值。

建议使用的实验方案

标准品浓度（nmol/L ）

A

40

40

样品

样品

样品

样品

样品

样品

样品

样品

样品

样品

B

20

20

样品

样品

样品

样品

样品

样品

样品

样品

样品

样品

C

10

10

样品

样品

样品

样品

样品

样品

样品

样品

样品

样品

D

5.0

5.0

样品

样品

样品

样品

样品

样品

样品

样品

样品

样品

E

2.5

2.5

样品

样品

样品

样品

样品

样品

样品

样品

样品

样品

F

1.25

1.25

样品

样品

样品

样品

样品

样品

样品

样品

样品

样品

G

0

0

样品

样品

样品

样品

样品

样品

样品

样品

样品

样品

H

样品

样品

样品

样品

样品

样品

样品

样品

样品

样品

样品

样品

局限

6号标准品以上的结果为非线性的，根据此标准曲线无法得到的结果。

试剂盒性能

1.灵敏度：zui小的检测浓度小于 1 号标准品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数 R 值为 0.990 。

2.特异性：不与其它细胞因子反应。

3.重复性：板内、板间变异系数均小于 10% 。

结 果 判 断 与 分 析

1、 仪器值：于波长450nm 的酶标仪上读取各孔的 OD 值

2、以吸光度 OD 值为纵坐标（ Y ），相应的 NAA 标准品浓度为横坐标（ X ），做得相应的曲线，样品的 NAA 含量可根据其 OD 值由标准曲线换算出相应的浓度。

3、 检测值范围：0-40nmol/L

4、 敏感度：  0.1  nmol/L