男女呻吟久久免费视频 组织氧化应激活性氧羟自由基比色法定量检测试剂盒产品说明书

【资料简介】

主要用途

组织 氧化应激活性氧羟自由基比色法定量检测试剂 是一种旨在通过捕获剂二甲基亚砜， 受到 羟自由基 的氧化 ，进而与偶氮染料反应，产生 黄色 产物 ，由分光光度仪比色分析 ， 来 定量检测 组织 细胞内 羟自由基 活性氧族的生成和增加 的而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。适用于各种 组织 （动物、人体等）裂解悬液的羟自由基检测，以及羟自由基激发剂和抗氧化清除剂（scanvenger）等的检测。可以被用于细胞凋亡、信号传递、衰老、代谢和营养学等的研究。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，显色清晰。

技术背景

超氧自由基阴离子（superoxide radical；O 2- ）、过氧化氢（hydrogen peroxide；H 2 O 2 ）、羟自由基或氢氧基 （hydroxyl radical；OH - ）、 过氧化基（peroxyl radical；ROO - ）、 氢过氧自由基（hydroperoxyl；HOO）、烷氧自由基（ alcoxyl radical）、 氮氧基（nitric Oxide；NO - ） 、过氧亚硝基阴离子（ peroxynitrite anion；ONOO - ） 次氯酸（ hypochlorous acid；HClO）、 半醌自由基 （semiquinone radical）、 单线态氧气（singlet oxygen）等细胞内活性氧族（Reactive Oxygen Species；ROS）的产生和增多，将导致细胞衰老或凋亡。其中 羟自由基或氢氧基具有极度反应性和毒性，同时半衰期短（10 －9 至10 －10 秒）。其产生主要是水分子受到高能量放射后裂解、过氧化物和次氯酸反应、过氧化氢的还原、超氧化物的歧化等形成。使用 二甲基亚砜（dimethy sulfoxide；DMSO），作为羟自由基的分子探针，捕获羟自由基，并被氧化为 甲基亚磺酸（methane sulfinic acid；MSA），在偶氮染料（diazonium dye）的作用下，产生黄色产物偶氮 亚砜（diazosulfone），通过分光光度仪（ 325 nm波长）， 检测 未反应棕色成分，以 测定羟自由基的含量。据此证明 组织 细胞内活性氧族的存在。其反应系统为：

            DMSO   +    OH      → MSA  +  CH 3

MSA  +diazonium dye   →  diazosulfone +   H +

产品内容

清理液（Reagent A） 120 毫升

标记液（Reagent B） 300 微升

酸性液（Reagent C） 1毫升

染色液（Reagent D） 5 瓶

净化液（Reagent E）                                    30毫升

终止液（Reagent F ） 50 毫升

萃取液（Reagent G ）                                     30毫升

稳定液（Reagent H） 2.5 毫升

标准液（Reagent I ）   2 毫 升

产品说明书 1份

保存方式

保存染色液（Reagent D） 和 标准液（Reagent G ）在－20 ℃ 冰箱里，避免光照；其余的保存在4 ℃ 冰箱里 ； 酸性液（Reagent C） 和净化液（Reagent E） 具有腐蚀性，注意操作安全； 净化液 （Reagent E） 、 萃取液（Reagent F）容易挥发， 注意密闭；有效保证6月

用户自备

1.5毫升离心管：用于标准液配制的容器

2.2 毫升离心管：用于样品操作的容器

5毫升玻璃管：用于样品操作的容器

15毫升锥形离心管：用于样品操作的容器

DOUNCE匀浆器：用于 组织 细胞裂解

（ 微型）台式离心机：用于样品操作

1毫升1厘米光径石英或玻璃比色皿：用于比色分析的容器

分光光度仪：用于 比色分析

实验步骤

一、样品准备

• 手术取出动物组织，并秤重以确定 500毫克 组织重量
• （选择步骤）放进预冷的15毫升锥形离心管
• （选择步骤）加入 3 毫升 清理液（Reagent A） 清洗1次
• 移入到一个液氮冻存管
• 即刻放进液氮罐过夜
• 次日从液氮罐里取出，即刻（zui快速度）用研磨棒碾碎组织成粉末状（ 注意： 切莫使组织冻融 ）
• 放进一个15毫升锥形离心管
• 加入 1 毫升 清理液（Reagent A）
• 强力涡旋震荡15秒
• 即刻放入 预冷的 DOUNCE匀浆器
• 在冰槽里用研磨棒匀化组织（约80下）
• 将所有组织匀浆物移入1 . 5毫升锥形离心管
• 放进4℃台式离心机离心5分钟，速度为10000g
• 小心移取3毫升上清液到新的预冷的1 . 5毫升锥形离心管
• 移取10微升进行蛋白定量检测（注意： 建议使用Bradford蛋白质浓度定量试剂盒－ ）
• 即刻放进－70℃保存或置于冰槽里继续后续操作

二、标准样品配制

• 准备好5个1.5毫升离心管，标记为1至5号管
• 分别加入 450 微升 清理液（Reagent A） 到2至5号管
• 移取 900 微升 标准液（Reagent I ） 到1号管
• 小心移取 450 微升1号管的 标准液（Reagent I ） 到2号管，混匀
• 小心移取 450 微升2号管稀释的 标准液（Reagent I ） 到3号管，混匀
• 小心移取 450 微升3号管稀释的 标准液（Reagent I ） 到4号管，混匀
• 将1至5号管放进冰槽里备用，避免光照；标准管浓度见下表

管号	清理液（Reagent A）	标准液（Reagent G ）	测定体系 标准 MSA 浓度
1	－	900 微升	100 微 摩尔/升
2	450 微升	450 微升1号管	50 微 摩尔/升
3	450 微升	450 微升2号管	25 微 摩尔/升
4	450 微升	450 微升3号管	12.5 微 摩尔/升
5	450 微升	0	0

• 标准曲线测定

实验开始前，将－ 20 ℃冰箱里的试剂盒中的 染色 液（Reagent D） 置入 室温下 ，然后移出 5 毫升 清理液（Reagent A） 到 染色 液（Reagent D） 瓶里，混匀后， 加入5毫升净化液Reagent E），混匀后，移取5毫升上层液相到新的10毫升瓶里(注意使用PE或玻璃瓶），标记为染色工作液，使用锡箔纸包裹避光，置于冰槽里备用（注意：可以使用6次）。然后进行下列操作

标记为 染色工作液 ，使用锡箔纸包裹避光， 置于冰槽里 备用（注意：可以使用 6 次） 。 放在暗室里备用 。然后进行下列操作

• 移取 400 微 升上述配制的 标准液（Reagent I ） 到 2 毫升离心管
• 加入 40 微升 酸性液（Reagent C）
• 加入 800 微升 染色 工作液 ，手动混匀
• 室温下孵育10分钟，避免光照
• 加入 1.2 微 升 终止液（Reagent F ） ，手动混匀
• 涡旋震荡1秒
• 静置分层
• 移取1毫升上层液相到新的2.2毫升离心管
• 加入 1 毫升 萃取液（ Reagent G ） ，手动混匀
• 涡旋振荡1秒
• 静置分层
• 小心移取 1毫 升 上层液相到新的比色皿
• 加入100毫升稳定液（Reagent H）
• 上下倾倒混匀
• 即刻放进分光光度仪（420nm波长）检测：获得吸光读数
• 重复实验步骤1至 15 四次
• 构建标准曲线：纵座标（Y轴）为吸光读数；横座标（X轴）为标准 MSA 浓度（ 微 摩尔/升）