女人天天干夜夜爽视频 GFAPELISA试剂盒说明

【资料简介】

女人天天干夜夜爽视频 GFAPELISA试剂盒说明
该试剂盒以HRP 标记的链霉亲和素复合物（HRP Streptavidin Conjugate，
HRP-SA）为基础，可用于检测细胞、组织内的特异性GFAP 抗原。该试剂盒具有
灵敏度高、特异性强、定性定位准确、背景清晰。在所用的GFAP 一抗与相应靶
抗原结合后，用生物化二抗与一抗特异性结合，zui后加入HRP-SA，形成抗原—
特异一抗—化二抗—HRP-SA 复合物，显微镜下观察成像。
试剂盒所含试剂：
试剂A 通透液：0.% Triton-X 00 0 mL（选用）
试剂B 封闭缓冲液（封闭用）20 mL
试剂C （*分装）已稀释的即用型GFAP 一抗（2.5ml）
试剂D （*分装）化羊抗兔IgG 支
（浓度.5 mg/mL，稀释比为:300~:500）50 μL+抗体稀释液20ml
试剂E HRP-SA 复合物 支（浓度 μM，稀释比:50~:200）00 μL
试剂F DAB 显色液5ml
用户自备试剂：
．0mM TBS（pH7.2~7.4）
三羟基氨基甲烷.2g
氯化钠7.6g
加蒸馏水800mL，浓盐酸调pH 值至7.2~7.4，zui后定容至000mL
TBS-T：TBS+Tween 20（0.05%体积比）
2．抗原修复液（依检测抗原不同而选择不同的修复液）
0mM pH6.0 柠檬酸缓冲液
柠檬酸0.38g
柠檬酸三钠2.45g
加蒸馏水900mL，浓盐酸调pH 值至6.0，zui后定容至000mL
或：0.5M EDTA 修复液（pH8.0）
EDTA·2H2O 86.g
柠檬酸三钠2.45g
加蒸馏水700mL，用0mM NaOH 调pH 值至8.0，zui后定容至000Ml
3. 缓冲甘油封固剂0 mL
4. Tween 20 5 mL
石蜡包埋组织切片免疫染色
实验步骤（建议方案）：
石蜡包埋组织切片3~4μm 厚度
.烤片：将待做切片置于切片架上，于60℃恒温烤箱中至少烤 hr；
2.脱蜡：切片放入盛有二甲苯的容器中脱蜡3 次（即二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ），每次
0 min；
3.水化：切片经下行酒精水化，无水乙醇5min，95%乙醇2 次（每次2min），85%
乙醇2 min；75%乙醇2min，自来水冲洗，ddH2O 洗2×2min；
4.抗原修复：根据抗体说明书方法进行抗原修复，常采用高压、微波（温
度达到98~00℃）或酶消化修复法，室温自然冷却，自来水冲洗，ddH2O 洗2×
2min，TBS 洗涤（2×2min）（具体修复方法见附）* 注：有些抗原勿需修复，
直接进入第5 步封闭。
5.封闭：滴加试剂B，37℃湿盒孵育30 min；
6.加一抗：滴加用试剂C（即用型一抗），37℃湿盒孵育2 hr 或4℃过夜；
7.洗涤：TBS-T 洗涤（3×5 min）；
8.封闭：滴加试剂B，37℃湿盒孵育0 min；
9.加二抗：滴加用抗体稀释液稀释的化二抗（试剂D），37℃湿盒中孵育
30 min；
0.洗涤：TBS-T 洗涤（3×5 min）；
.封闭：滴加试剂Tween 20，37℃湿盒孵育封闭20 min；
2.加HRP-SA：滴加用试剂C 稀释的试剂E（：50~200，终浓度5~20 nM），37
℃湿盒中孵育30 min；
3.洗涤：TBS-T 洗涤（3×5 min），TBS 洗涤（2×5 min）；
4.显色：应用DAB 溶液（试剂F）显色；
5.复染：自来水充分冲洗，复染，脱水，透明；
6.封片：待组织标本干后，用试剂缓冲甘油封固剂封片；
7.观察成像：显微镜下观察成像。
注意事项：
. 修复后缓冲液须自然冷却，自来水冲洗后方能把切片取出，骤冷有可能导致
结晶或抗原封闭。
2. 缓冲液的量必须保证所有切片都能浸泡到，用过的柠檬酸缓冲液不能反复使
用。
3. 若试剂为微量浓缩液，用前应低速离心，将内盖和管壁附着的溶液离到底部。
4. 封片前一定要换用TBS 充分洗涤，以便洗去组织上残留的Tween 20，否则会
影响结果观察。
5. 如须复染细胞核，则在封片前复染或直接采用含有染核试剂的封片剂进行封
片。
附：
抗原修复方法
常用抗原修复液：柠檬酸缓冲液（0.0M pH6.0）、EDTA 抗原修复液（pH8.0 或9.0）
等等。
一、酶消化修复法
切片脱蜡水化处理，TBS 冲洗，在组织上滴加或，37℃孵育
20~30min 后TBS 冲洗即可。
二、微波抗原修复法
微波盒中加入抗原修复液微波加热至沸腾，将脱蜡水化后的切片置于耐高温塑料
切片架上，放入已沸腾的缓冲液中，中档或继续微波0~5min，取出微波
盒冷却至室温后，自来水冲洗，取出切片。因不同微波炉微波处理时间存在差异，
须自行调整。
三、直接高压抗原修复法
取修复液于不锈钢高压锅中加热至沸腾，将组织切片置于耐高温切片架上，修复
液沸腾后放入切片架，盖上锅盖，待喷气后计时.5~2.5min 即可脱离热源，自
然冷却至室温后自来水冲洗，取出切片。此方法适用于较难检测或核抗原的修复。
四、隔水式高压抗原修复法
不锈钢高压锅中加自来水加热至沸腾，微波盒中加入修复液于微波炉中加热至沸
腾，将切片放入微波盒中，再将微波盒放入高压锅中盖上锅盖，待喷气后计时
4~8 min 即可关闭热源，自然冷却至室温后自来水冲洗，取出切片。此方法适用
于较难检测或核抗原的修复。