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紫外线（UV）吸收法测定核酸的含量2016/6/30
实验原理核酸及其衍生物，核苷酸、核苷、嘌呤和嘧啶有吸收UV的性质，其吸收高峰在260nm波长处。核酸的摩尔消光系数（或称吸收系数）用来表示。为每升溶液中含有1克原子核酸磷的光吸收值（即A值）（表）。测...
单克隆抗体的纯化2016/6/29
一、腹水型单抗的纯化在单抗纯化之前，一般均需对腹水进行预处理，目的是为了进一步除去细胞及其残渣、小颗粒物质、以及脂肪滴等。常用的方法有二氧化硅吸附法和过滤离心法，以前者处理效果为佳，而且操作简便。1、...
抗体的保存（子科生物）2016/6/29
抗体的保存方法一般有以下三种：一、腹水腹水重组后可加入少量叠氮纳等来阻止细菌生长。腹水应当冻存。单抗能够小包装保存以避免反复冻融。若要保存较长时间，则不要在4℃。和血清不同，腹水中含有蛋白酶，会使抗体...
小分子抗原制备要点和注意事项2016/6/28
小分子抗原现在做的zui多的是农yao和兽药，这方面的文献也很多。以前查过一些材料，作者觉得小分子抗原能否制备出高性能的单克隆抗体主要以下几点决定。1、对于半抗原结构的选择，如果待测物本身含有NH2，...
大鼠和小鼠尾静脉注射技巧与经验分享2016/6/28
一、将小鼠固定好，将尾巴拉直，绷紧小鼠姓情较温顺，一般不会咬人，比较容易抓取固定。通常用右手提起小鼠尾巴将其放在鼠笼盖或其它粗糙表面上，在小鼠向前挣扎爬行时，用左手拇指和食指捏住其双耳及颈部皮肤，将小...
免疫血清的制备及效价测定2016/6/27
制备免疫血清的传统方法是将抗原注入动物体内，由动物体内B细胞增殖分化成浆细胞产生抗体。由于抗原分子（*抗原）具有多种抗原决定簇，每一种抗原决定簇可以激活具有相应抗原受体的B细胞系产生该决定簇的抗体，因...
常用抗原修复方法（子科生物）2016/6/27
用于福尔马林固定的石蜡包埋组织切片：1）抗原热修复可根据实验室的具体条件，选用微波炉抗原修复、高压锅抗原修复或水浴高温抗原修复。抗原热修复可选用各种缓冲液，如TBS、PBS、重金属盐溶液等，但实验证明...
生物分子类实验室常用实验技术原理总结2016/6/24
一、gstpull-down实验基本原理:将靶蛋白-GST融合蛋白亲和固化在谷胱甘肽亲和树脂上,作为与目的蛋白亲和的支撑物,充当一种“诱饵蛋白”,目的蛋白溶液过柱,可从中捕获与之相互作用的“捕获蛋白”...
ELISA实验中的封闭液等常用试剂的配制2016/6/23
elisa实验中的封闭液小知识ELISA的试剂盒说明上写封闭液用蔗糖溶液，一般是用BSA或酪蛋白的蛋白分子封闭空白位点，蔗糖封闭的原理：1、ELISA实验中，蔗糖本身没有封闭作用;2、封闭液一般是BS...
细胞凋亡检测操作步骤之ELISA法2016/6/23
细胞凋亡发生时，内源性核酸内切酶将分解核小体区间的双链DNA，但核小体本身由于由组蛋白紧密结合而免受切割，单克隆抗体可以与核小体形成夹心结构，可通过检测核小体判断细胞是否经历凋亡事件。(一)原理细胞凋...
减少ELISA实验中背景因素的影响2016/6/22
elisa实验的原理似乎很简单，不外乎固定抗原，添加一抗、二抗和底物，间中夹杂着洗涤和封闭。然而，即使是平淡无奇的洗涤和封闭，如果做得不太好，也有可能毁了整个实验。在实验结束时，我们是否能获得有意义的...
检测蛋白磷酸化的六种方法及其优缺点2016/6/22
蛋白激酶将磷酸基团从ATP转移到蛋白多肽底物上的丝氨酸、苏氨酸或酪氨酸残基，直接影响目标的活性和功能。放射性研究表明，真核细胞中大约30%的蛋白经过磷酸化修饰。这一关键的翻译后修饰调控了广泛的细胞活性...
中国科学家新建立一种高灵敏的电化学发光免疫检测方法2016/6/22
中国国民核生化灾害防护国家重点实验室防化研究院的研究人员利用elisa技术以剧毒生物毒素相思子毒素(Abrin)为检测对象，建立了一种高灵敏的电化学发光免疫检测方法。该论文已发表于近期的《分析化学》杂...
EMSA实验注意事项及常见问题分析2016/6/21
1.什么是凝胶迁移或电泳迁移率实验?凝胶迁移或电泳迁移率实验(EMSA)是一种研究DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用的技术，可用于定性和定量分析。这一技术zui初用于研究DNA结合蛋白，目...
三种细胞免疫荧光染色操作步骤2016/6/21
免疫荧光染色的主要原理是利用抗原抗体之间的特异性结合来显示目的蛋白，主要包括蛋白和一抗结合，其次是带有荧光基团的二抗识别并结合一抗，荧光显微镜下即可观察到荧光，下文主要列举了三种细胞免疫荧光染色的实验...
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