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做标准ELISA曲线重点注意细节

2022-7-20  阅读(231)

     在ELISA实验结束后,我们得到的是经酶标仪得出的标准品以及样本的OD值。其中,标准品的浓度已知,我们可以利用标准品的OD值及其相对应的浓度,以OD值为横坐标,浓度为纵坐标,做一条标准曲线,并用公式表示出来。这样,我们把样本的OD值以X值代入,便可求出Y值,即样本浓度。

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                                                                                ELISA标准曲线

      做ELISA实验的都知道ELISA标准曲线做的好与坏会直接影响到实验的结果,甚至是关系到ELISA试剂盒实验的成败。今天就一起来看下我们在做ELISA标准曲线时需要重点注意的细节问题。

1. 设置标准曲线样品的标准浓度范围要有一个比较大的跨度,并且要能涵盖你所要检测实验样品的浓度,即样品的浓度要在标准曲线浓度范围之内,包括上限和下限。而对于呈S型的标准曲线,尽量要使实验样品的浓度在中间坡度*陡段,即曲线几乎成直线的范围内。

2. 检测标准样品时,应按浓度递增顺序进行,以减少高浓度对低浓度的影响,提高准确性。

3. 标准曲线的样品数一般为7个点,但至少要保证有5个点。

4. 做出的标准曲线相关系数因实验要求不同而有所变动,但一般来说,相关系数R至少要大于0.98,对于有些实验,至少要0.99甚至是0.999。

5. 样品的浓度等指标是根据标准曲线计算出来的,所以首先要把做标准曲线看作是比做正式实验还要重要的一件事,否则后面的实验结果无从谈起。

6. 采用倍比稀释法配制标准曲线中的标准样品浓度,这样就能够保证标准样品的浓度不会出现较大的偏离。








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