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上海邦景实业有限公司
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干粉培养基原倍液的配制过程及注意点
2022-7-25 阅读(434)
细胞培养基既是培养细胞中供给细胞营养和促使细胞生殖增殖的基础物质，也是培养细胞生长和繁殖的生存环境。现在详细了解干粉培养基原倍液的配制:
一、配制过滤除菌的细胞培养基
1、 阅读培养基使用说明，确定需要添加何种添加剂（如NaHCO3、L-谷an酰胺、丙酮酸钠、HEPES等）。
2、根据所需将培养基全部倒入一容器中，用少量注射用水（20℃～30℃）将袋内残留培养基洗下，并入容器。加注射用水至总体积的95％，轻微搅拌溶解。
3、 加入规定量的碳酸氢na及所要添加的物质。
4、 轻微搅拌溶解，加注射用水至规定体积。
5、 用1 mol / L 氢氧化钠溶液或 1 mol / L 盐酸溶液调pH至所需值。
6、 用0.22 μm滤膜正压过滤除菌。
7、溶液应在2℃－8℃下避光保存。
具体使用方法参照培养基包装袋上的说明书。
二、配制可高压灭菌细胞培养基
1、根据所需将培养基全部倒入一容器中，用少量注射用水（20℃～30℃）将袋内残留培养基洗下，并入容器。加注射用水至总体积的95％，轻微搅拌溶解
2、在121℃、15psi下灭菌15分钟。
3、 待溶液冷却至室温，加入无菌0.2 mol / L L－谷an酰胺溶液规定体积、无菌7.5％（w/v）碳酸氢na溶液规定体积，加注射用水（20℃～30℃）至规定体积，混匀。
4、如果必要，用1 mol / L 氢氧化钠溶液或 1 mol / L 盐酸溶液调pH至所需值。
5、溶液应在2℃－8℃下避光保存。
具体使用方法参照培养基包装袋上的说明书
注意事项：
1、 细胞培养用水一般为三蒸水（经石英蒸馏器蒸馏）或超纯水，医药上一般为注射用水。
2、 建议尽量选择与所用量相匹配的包装一次使用，因为包装一旦打开，组分可能会变质或因受潮而结团。
3、 溶解干粉培养基时先加入终体积90％－95％的培养用水，添加剂加完后再补足。
4、 如需添加的组分较多时，某一组分*溶解后，再添加另一组分。
5、 待培养基*溶解后再加入碳酸氢na，以免产生沉淀。
6、 所有成分*溶解后，培养基应立即过滤或高压除菌，以免产生沉淀或有微生物污染。
7、 在过滤除菌时，一般情况下应调pH比所需值低0.1～0.2个单位，因过滤除菌后，pH值会升高约0.2。
8、在细胞培养过程中，建议不加或加少量的抗生素，如血清的浓度较低则所加抗生素的量也要相应降低一些。
9、 建议用1 N HCl或1 N NaOH来调节培养基的pH，因为用碳酸氢na来调对培养液的渗透压影响比较大。
