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上海邦景实业有限公司
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人胚肾细胞实验中血清样本及反应试剂操作标准
2018-4-23 阅读(1330)
人胚肾细胞实验中血清样本及反应试剂操作标准
在现在的ELISA商品试剂盒中，血清样本的加入几乎是*的要使用微量加样器加入样本的步骤。使用微量加样器加样必须注意的关键点是：加样不可太快，要避免加在孔壁上部，不可溅出和产生气泡。加样太快，无法保证微量加样的准确性和均一性。加在孔壁上部的非包被区，易导致非特异吸附。溅出会对邻近孔产生污染。出现气泡则反应液界面有差异。试剂的加入在国产试剂盒中基本上均是从滴瓶中滴加，除了要注意滴加的角度外，滴加的速度也很重要，滴加太快，很容易出现重复滴加或加在两孔之间的现象，这样就会在孔内的非包被区出现非特异吸附，从而引起非特异显色。所以，有时候一份标本用相同的试剂盒这次测定为阳性，下次测定为阴性，往往就是上述加样及试剂的错误所致。
标准操作要点
1. 标本的采取和保存
大部分ELISA 检测均以血清为标本。血清标本可按常规方法采集，应注意避免溶血，红细胞溶解时会释放出具有过氧化物酶活性的物质，以HRP 为标记的ELISA 测定中，溶血标本可能会增加非特异性显色。血清标本宜在新鲜时检测。如有细菌污染，菌体中可能含有内源性HRP，也会产生假阳性反应。一般说来，在5 天内测定的血清标本可放置于4℃，标本在冰箱中保存时间过长导致血清IgG 聚合，使间接法的试剂本底加深。超过一周测定的需－20℃保存。冻结血清融解后，蛋白质局部浓缩，分布不均，应充分混匀并避免产生气泡。混浊或有沉淀的血清标本应先离心或过滤，澄清后再检测。反复冻融会使抗体效价跌落，所以测抗体的血清标本如需保存作多次检测，宜少量分装冰存。保存血清自采集时就应注意无菌操作，也可加入适当防腐剂。抗凝不*的标本因纤维蛋白原的干扰而造成假阳性，建议尽量不用抗凝血尤其是肝素抗凝剂。
2.加样
加样时应将所加物加在ELISA 板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可溅出。
3.保温
在建立ELISA 方法作反应动力学研究时，实验表明，两次抗原抗体反应一般在37℃经
1-2 小时，产物的生成可达。为避免蒸发，板上应加盖，也可用塑料贴封纸或保鲜膜覆盖板孔，反应板不宜叠放，以保证各板的温度都能迅速平衡。应注意温育的温度和时间应按规定力求准确。由于公司的试剂盒温育是在空气浴中完成，采用水浴会造成值偏高或花板。另外温育中还有边缘效应，边上的值会偏高，建议为了客观的判断结果，将质控放在非边缘位置。
4.洗涤
洗涤在ELISA 过程中虽不是一个反应步骤，但却决定着实验的成败。ELSIA 就是靠洗涤来达到分离游离的和结合的酶标记物的目的。通过洗涤以清除残留在板孔中没能与固相抗原或抗体结合的物质，以及在反应过程中非特异性地吸附于固相载体的干扰物质。聚苯乙烯等塑料对蛋白质的吸附是普遍性的，而在洗涤时应把这种非特异性吸附的干扰物质洗涤下来。可以说在ELISA 操作中，洗涤是zui主要的关键技术，应引起操作者的高度重视，操作者应严格按要求洗涤，不得马虎。
人胚肾细胞HIPEpiC cDNA 人虹膜色素上皮细胞cDNA 20 reactions
HConF cDNA 人结膜成纤维细胞cDNA 20 reactions
HNPCEpiC cDNA 人无色素睫状上皮细胞 cDNA 20 reactions
HTMC cDNA 人小梁网细胞cDNA 20 reactions
HAmEpiC cDNA 人羊膜上皮细胞cDNA 20 reactions
HVT cDNA 人滋养层绒毛细胞cDNA 20 reactions
HVMF cDNA 人绒毛间叶成纤维细胞cDNA 20 reactions
HPA-v cDNA 人前脂肪细胞-内脏cDNA 20 reactions
HPA-s cDNA 人前脂肪细胞-皮下cDNA 20 reactions
HMSC-bm cDNA 人间充质干细胞(骨髓)cDNA 20 reactions
HMSC-ad cDNA 人间充质干细胞(脂肪)cDNA 20 reactions
HMSC-hp cDNA 人间充质干细胞(肝脏)cDNA 20 reactions
HUMSC cDNA 人脐带间充质干细胞cDNA 20 reactions
HPMSC cDNA 人肺间充质干细胞cDNA 20 reactions
HMEpiC cDNA 上皮细胞cDNA 20 reactions
HMF cDNA 成纤维细胞cDNA 20 reactions
HUVEC cDNA 人脐静脉内皮细胞cDNA 20 reactions
HUAEC cDNA 人脐动脉内皮细胞cDNA 20 reactions
HUVSMC cDNA 人脐静脉平滑肌细胞cDNA 20 reactions
HUASMC cDNA 人脐动脉平滑肌细胞cDNA 20 reactions
HBMEC tRNA 人脑微血管内皮细胞总RNA 10 µg
HBVSMC tDNA 人脑血管平滑肌细胞总RNA 10 µg
HBVC tRNA 人脑血管周细胞总RNA 10 µg
HCPEC tRNA 人脉络丛内皮细胞总RNA 10 µg
HCPEpiC tRNA 人脉络丛上皮细胞总RNA 10 µg
HCPF tRNA 人脉络丛成纤维细胞总RNA 10 µg
HMC tRNA 人脑膜细胞总RNA 10 µg
HN tRNA 人神经元总RNA 10 µg
HCGC tRNA 人小脑颗粒细胞总RNA 10 µg
HN-h tRNA 人海马趾神经细胞总RNA 10 µg
HOPC tRNA 人少突胶质前体细胞总RNA 10 µg
HOPC-os tRNA 人少突胶质前体细胞(悬浮生长)总RNA 10 µg
HSC tRNA 人雪旺细胞总RNA 10 µg人胚肾细胞
