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大鼠源细胞结果的判断性

2020-10-14  阅读(181)

大鼠源细胞试剂准备:

1. 大鼠源细胞回温:首先在实验前30 min将试剂盒,待测样本放置于室温下,浓缩洗涤液如出现结晶,请放入37℃温浴直到结晶全部溶解。

2. 配制洗涤液:预先计算好稀释后的洗涤液使用体积,然后用双蒸水或去离子水将20倍浓缩洗涤液稀释成1倍应用液,未用完的浓缩洗涤液放入4℃冰箱保存。

3. 标准品梯度稀释:加入标准品稀释液1ml至冻干标准品中,静置15分钟待其*溶解后轻轻混匀(浓度为5.5ng/ml),然后按照以下浓度:5.5、2.75、1.375、0.687、0.343、0.171、0.085、0 ng/ml进行稀释。复溶过的标准品原液(5.5ng/ml)未用完的应废弃或根据需要按照一次用量分装,并将其贮存在-20~-80℃冰箱。

大鼠源细胞检测步骤:

1.通过计算并确定一次性实验所需的板条数,取出所需板条放置在框架内,暂时用不到板条请放回铝箔袋密封,保存于4℃。

2.建议设置本底较正孔,即空白孔,设置方法为该孔只加TMB显色液和中止液。每次实验均需做标准品对照并画出标准曲线。

3.分别将标本或不同浓度标准品(10ul/孔)加入相应孔中,快速加入大鼠源细胞结合物(100ul/孔)。用封板胶纸封住反应孔,室温(25~28℃)孵育120分钟。

4.洗板5次,且一次置厚吸水纸上拍干。

5.加入显色剂TMB100ul/孔,避光室温(25~28℃)孵育20分钟。

6.加入终止液50ul/孔,混匀后即刻测量OD450值。

大鼠源细胞结果判断:

1.复孔的值在20%的差异范围内结果才有效,复孔的值平均后可作为测量值。

2.每个标准品或标本的OD值应减去本底校正孔的OD值。

3.手工绘制标准曲线。以标准品浓度作横坐标,OD值作纵坐标,以平滑线连接各大鼠源细胞标准品的坐标点。通过标本的OD值可在标准曲线上查出其浓度。

4.若标本OD值高于标准曲线上限,应适当稀释后重测,计算浓度时应乘以稀释倍数。 



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