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上海邦景实业有限公司
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大鼠源细胞结果的判断性
2020-10-14 阅读(179)
大鼠源细胞试剂准备：
1. 大鼠源细胞回温：首先在实验前30 min将试剂盒，待测样本放置于室温下，浓缩洗涤液如出现结晶，请放入37℃温浴直到结晶全部溶解。
2. 配制洗涤液：预先计算好稀释后的洗涤液使用体积，然后用双蒸水或去离子水将20倍浓缩洗涤液稀释成1倍应用液，未用完的浓缩洗涤液放入4℃冰箱保存。
3. 标准品梯度稀释：加入标准品稀释液1ml至冻干标准品中，静置15分钟待其*溶解后轻轻混匀(浓度为5.5ng/ml)，然后按照以下浓度：5.5、2.75、1.375、0.687、0.343、0.171、0.085、0 ng/ml进行稀释。复溶过的标准品原液（5.5ng/ml）未用完的应废弃或根据需要按照一次用量分装，并将其贮存在-20～-80℃冰箱。
大鼠源细胞检测步骤：
1.通过计算并确定一次性实验所需的板条数，取出所需板条放置在框架内，暂时用不到板条请放回铝箔袋密封，保存于4℃。
2.建议设置本底较正孔，即空白孔,设置方法为该孔只加TMB显色液和中止液。每次实验均需做标准品对照并画出标准曲线。
3.分别将标本或不同浓度标准品(10ul/孔)加入相应孔中，快速加入大鼠源细胞结合物(100ul/孔)。用封板胶纸封住反应孔，室温（25～28℃）孵育120分钟。
4.洗板5次，且一次置厚吸水纸上拍干。
5.加入显色剂TMB100ul/孔，避光室温（25～28℃）孵育20分钟。
6.加入终止液50ul/孔,混匀后即刻测量OD450值。
大鼠源细胞结果判断：
1.复孔的值在20%的差异范围内结果才有效，复孔的值平均后可作为测量值。
2.每个标准品或标本的OD值应减去本底校正孔的OD值。
3.手工绘制标准曲线。以标准品浓度作横坐标，OD值作纵坐标，以平滑线连接各大鼠源细胞标准品的坐标点。通过标本的OD值可在标准曲线上查出其浓度。
4.若标本OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测，计算浓度时应乘以稀释倍数。
