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其它类细胞原理与步骤

2020-11-4  阅读(304)

其它类细胞原理:

      当两性分子分散于水相时,分子的疏水尾部倾向于聚集在一起,避开水相,而亲水头部暴露在水相,形成具有双分子层结构的封闭囊泡,称为脂质体.脂质体在超分子化学及药学等多个学科领域得到了非常广泛的应用.由于脂质体在化学结构上与生物细胞膜相似,常用作人工细胞膜,以模拟细胞信号的转导,研究物质的跨膜运送机理以及构建仿生分子器件等。

其它类细胞具体步骤:

一、细胞复苏
将冻存细胞从液氮中取出后,在37℃水浴锅内不断摇动促进其融化。移入15ml离心管中,加入10ml预热的DMEM*培养基,轻轻吹匀,离心,2000rpmX2min,弃上清液。加入10ml DMEM培养基清洗,弃上清液。加入10ml DMEM*培养基,轻轻吹打,接种于10cm盘中,在含5%CO2的细胞培养箱中培养。

二、细胞传代
细胞密度达到80%~90%时.去培养基,10ml PBS清洗2次。加入3ml含0.25%EDTA的,放入细胞培养箱3min。加人1ml DMEM*培养基终止消化,转移至15ml离心管。加入10ml PBS清洗细胞培养盘,转移至15ml离心管,2000rpmX2min,弃上清液。再加入10ml PBS(经高压灭菌,保存于40C),吹匀,吸取10微升进行计数,按照1×105/盘接种,在含5%CO2的细胞培养箱继续培养。

三、细胞冻存
细胞密度达到80%~90%时,去培养基,10ml PBS清洗2次。加入3ml含0.25%EDTA的,放入细胞培养箱3min。加入lmlDMEM*其它类细胞基终止消化,转移至15ml离心管。加入10ml PBS清洗细胞培养盘,转移至15ml离心管,2000rpmX2min,弃上清液。加入1ml冻存液(90%血清,10%DMSO),放入冻存盒内(盒内有异丙醇,以保证温度降低的速度),立即放入一80℃冰箱内,过夜,第二天放入液氮中,可以保存至少两年,如不放入液氮,可以保存三个月。

其它类细胞操作注意:

1.不同的试剂盒因工艺和操作方法略有不同,务必按照所用人ELISA试剂盒说明书严格操作,否则容易产生检测结果的不确定性.

2.若不同批号其它类细胞的不同组分(A液或酶工作液),或不同试剂的不同组分进行交叉使用,有可能出现显色浅或本底高,花板等情形。

3.反应时间的误差,做大量标本时,一孔和后一孔以及一些特殊标本可能影响较大。

4.临界值附近标本波动为正常现象,任何试剂均不可避免。可以考虑将标本做奇数次复检。

5.加样时样品量误差,对于阴或很阳的标本影响不大,但对阈值附近的标本影响,建议校对加样器。 



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