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上海邦景实业有限公司
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其它类细胞原理与步骤
2020-11-4 阅读(304)
其它类细胞原理：
当两性分子分散于水相时,分子的疏水尾部倾向于聚集在一起,避开水相,而亲水头部暴露在水相,形成具有双分子层结构的封闭囊泡,称为脂质体.脂质体在超分子化学及药学等多个学科领域得到了非常广泛的应用.由于脂质体在化学结构上与生物细胞膜相似,常用作人工细胞膜,以模拟细胞信号的转导,研究物质的跨膜运送机理以及构建仿生分子器件等。
其它类细胞具体步骤：
一、细胞复苏
将冻存细胞从液氮中取出后，在37℃水浴锅内不断摇动促进其融化。移入15ml离心管中，加入10ml预热的DMEM*培养基，轻轻吹匀，离心，2000rpmX2min，弃上清液。加入10ml DMEM培养基清洗，弃上清液。加入10ml DMEM*培养基，轻轻吹打，接种于10cm盘中，在含5%CO2的细胞培养箱中培养。
二、细胞传代
细胞密度达到80%~90%时．去培养基，10ml PBS清洗2次。加入3ml含0．25%EDTA的，放入细胞培养箱3min。加人1ml DMEM*培养基终止消化，转移至15ml离心管。加入10ml PBS清洗细胞培养盘，转移至15ml离心管，2000rpmX2min，弃上清液。再加入10ml PBS（经高压灭菌，保存于40C），吹匀，吸取10微升进行计数，按照1×105/盘接种，在含5%CO2的细胞培养箱继续培养。
三、细胞冻存
细胞密度达到80%～90%时，去培养基，10ml PBS清洗2次。加入3ml含0.25%EDTA的，放入细胞培养箱3min。加入lmlDMEM*其它类细胞基终止消化，转移至15ml离心管。加入10ml PBS清洗细胞培养盘，转移至15ml离心管，2000rpmX2min，弃上清液。加入1ml冻存液（90%血清，10%DMSO），放入冻存盒内（盒内有异丙醇，以保证温度降低的速度），立即放入一80℃冰箱内，过夜，第二天放入液氮中，可以保存至少两年，如不放入液氮，可以保存三个月。
其它类细胞操作注意：
1.不同的试剂盒因工艺和操作方法略有不同，务必按照所用人ELISA试剂盒说明书严格操作，否则容易产生检测结果的不确定性.
2.若不同批号其它类细胞的不同组分(A液或酶工作液)，或不同试剂的不同组分进行交叉使用，有可能出现显色浅或本底高，花板等情形。
3.反应时间的误差，做大量标本时，一孔和后一孔以及一些特殊标本可能影响较大。
4.临界值附近标本波动为正常现象，任何试剂均不可避免。可以考虑将标本做奇数次复检。
5.加样时样品量误差，对于阴或很阳的标本影响不大，但对阈值附近的标本影响，建议校对加样器。
