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上海博湖生物科技有限公司
主营产品: 高密度脂蛋白ELISA检测试剂盒,同型半胱氨酸ELISA检测试剂盒,游离脂肪酸ELISA检测试剂盒 |

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人胰脂肪酶(PL)ELISA试剂盒样品处理及操作步骤
2019-5-31 阅读(181)
提 供 商 | 上海博湖生物科技有限公司 | 资料大小 | 15.5KB |
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资料图片 | 下载次数 | 10次 | |
资料类型 | WORD 文档 | 浏览次数 | 181次 |
人胰脂肪酶(PL)ELISA试剂盒样品处理及操作步骤
样品收集、处理及保存方法
1、 血 清-----操作过程中避免任何细胞刺激,使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后,1000×g离心10分钟将血清和红细
胞迅速小心地分离。
2、 血 浆----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测,1000×g离心30分钟去除颗粒。
3、 细胞上清液--1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4、 组织匀浆---将组织加入适量盐水捣碎,1000×g离心10分钟,取上清液。
5、 保 存----如果样品不立即使用,应将其分成小部分-80 ℃保存,避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血,如果
血清中大量颗粒,检测前先离心或过滤,不要在37℃或更高的温度加热解冻,应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
操作步骤
1. 使用前,将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫,以免加样时加入大量的气泡,产生加样上的误差。
2. 根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数,每个标准品和空白孔建议做复孔,每个样品根据自己的数量来定,能使
用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液1:1稀释后加入50ul于反应孔内。
3. 加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的标记的抗体,盖上膜板,轻轻振荡
混匀,37℃温育1小时。
4. 甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次,如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加
一次。
5. 每孔加入50ul的亲和链酶素-HRP,轻轻振荡混匀,37℃温育30分钟。
6. 甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次,如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加
一次。
7. 每孔加入底物A、B各50ul,轻轻振荡混匀,37℃温育10分钟。避免光照。
8. 取出酶标板,迅速加入50ul终止液,加入终止液后应立即测定结果。
9. 在450nm波长处测定各孔的OD值。