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人胰脂肪酶(PL)ELISA试剂盒样品处理及操作步骤

2019-5-31  阅读(181)

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【详细说明】

                        人胰脂肪酶(PL)ELISA试剂盒样品处理及操作步骤

样品收集、处理及保存方法

1、 血  清-----操作过程中避免任何细胞刺激,使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后,1000×g离心10分钟将血清和红细

胞迅速小心地分离。

2、 血  浆----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测,1000×g离心30分钟去除颗粒。

3、 细胞上清液--1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。

4、 组织匀浆---将组织加入适量盐水捣碎,1000×g离心10分钟,取上清液。

5、 保  存----如果样品不立即使用,应将其分成小部分-80 ℃保存,避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血,如果

血清中大量颗粒,检测前先离心或过滤,不要在37℃或更高的温度加热解冻,应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

操作步骤

1. 使用前,将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫,以免加样时加入大量的气泡,产生加样上的误差。

2. 根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数,每个标准品和空白孔建议做复孔,每个样品根据自己的数量来定,能使

用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液1:1稀释后加入50ul于反应孔内。

3. 加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的标记的抗体,盖上膜板,轻轻振荡

混匀,37℃温育1小时。

4. 甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次,如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加

一次。

5. 每孔加入50ul的亲和链酶素-HRP,轻轻振荡混匀,37℃温育30分钟。

6. 甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次,如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加

一次。

7. 每孔加入底物A、B各50ul,轻轻振荡混匀,37℃温育10分钟。避免光照。

8. 取出酶标板,迅速加入50ul终止液,加入终止液后应立即测定结果。

9. 在450nm波长处测定各孔的OD值。

 



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