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上海博湖生物科技有限公司
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人胰脂肪酶（PL）ELISA试剂盒样品处理及操作步骤
2019-5-31 阅读(183)
| 提 供 商 | 上海博湖生物科技有限公司 | 资料大小 | 15.5KB |
|---|---|---|---|
| 资料图片 | 下载次数 | 10次 | |
| 资料类型 | WORD 文档 | 浏览次数 | 183次 |
人胰脂肪酶(PL)ELISA试剂盒样品处理及操作步骤
样品收集、处理及保存方法
1、 血 清-----操作过程中避免任何细胞刺激，使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000×g离心10分钟将血清和红细
胞迅速小心地分离。
2、 血 浆----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测，1000×g离心30分钟去除颗粒。
3、 细胞上清液--1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4、 组织匀浆--－将组织加入适量盐水捣碎，1000×g离心10分钟，取上清液。
5、 保 存----如果样品不立即使用，应将其分成小部分-80 ℃保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血，如果
血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤，不要在37℃或更高的温度加热解冻，应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
操作步骤
1． 使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。
2． 根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数，每个标准品和空白孔建议做复孔，每个样品根据自己的数量来定，能使
用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液1：1稀释后加入50ul于反应孔内。
3． 加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的标记的抗体，盖上膜板，轻轻振荡
混匀，37℃温育1小时。
4． 甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次，如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加
一次。
5． 每孔加入50ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。
6． 甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次，如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加
一次。
7． 每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育10分钟。避免光照。
8． 取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。
9． 在450nm波长处测定各孔的OD值。
