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3-4周龄雌性大鼠卵巢颗粒细胞的原代培养
2024-6-28 阅读(1178)
1. 3-4周龄雌性SD大鼠，皮下注射孕马血清促xing腺激素(Pregnant Mare Serum Gonadotropin，PMSG) 60IU，48h后颈椎脱臼处死。
2. 大鼠浸入75%乙醇浸泡5-10分钟，转移到通风柜中的解剖盘中。
3. 在距离大鼠脊柱1cm、肋下1cm的交叉位置剪开皮肤、肌肉，可见白色的脂肪组织，拉出脂肪组织，可见到粉红色的卵巢，摘除卵巢。
4. 取卵巢放入预冷的含双抗的缓冲液中，用缓冲液清洗卵巢三次，去除周围组织及表面包膜。
5. 在解剖显微镜下用1mL的注射器刺破卵泡，释放颗粒细胞。
6. 将悬液通过70μm筛网过滤至50ml离心管中，之后200g，离心7min。
7. 计数，种植到24孔板和大皿中。
8. FSHR表达鉴定颗粒细胞。
