大鼠丙酮酸激酶M2型同工酶（M2-PK）ELISA试剂盒产品介绍

大鼠丙酮酸激酶M2型同工酶（M2-PK） elisa 试剂盒 使用说明书

Elisa kit 规格： 48 孔配置 /96 孔配置

标准品稀释液： 1.5ml × 1 瓶

酶标试剂： 3 ml × 1 瓶（ 48 ） /6 ml × 1 瓶（ 96 ）

【大鼠丙酮酸激酶M2型同工酶（M2-PK）elisa试剂盒】 本试剂仅供研究使用

计算：

以标准物的浓度为横坐标， OD 值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的 OD 值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与 OD 值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的 OD 值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。

试剂盒组成 ：

封板膜 :2 片（ 48 ） /2 片（ 96 ）

说明书 :1 份

密封袋 :1 个

标准品： 2700ng/L 0.5ml × 1 瓶 0.5ml × 1 瓶 2-8 ℃保存

酶标包被板 : 1 × 48 1 × 96 2-8 ℃保存

样品稀释液 : 3ml × 1 瓶 6 ml × 1 瓶 2-8 ℃保存

显色剂 A 液 : 3ml × 1 瓶 6 ml × 1 瓶 2-8 ℃保存

显色剂 B 液 : 3ml × 1 瓶 6 ml × 1 瓶 2-8 ℃保存

终止液 : 3ml × 1 瓶 6ml × 1 瓶 2-8 ℃保存

浓缩洗涤液 : （ 20ml × 20 倍）× 1 瓶 （ 20ml × 30 倍）× 1 瓶 2-8 ℃保存

实验原理：

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠丙酮酸激酶 M2 型同工酶 （M2-PK） 水平。用纯化的大鼠丙酮酸激酶 M2 型同工酶 （M2-PK） 抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入 丙酮酸激酶 M2 型同工酶 （M2-PK） ，再与 HRP 标记的丙酮酸激酶 M2 型同工酶 （M2-PK） 抗体结合，形成抗体 - 抗原 - 酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物 TMB 显色。 TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的 丙酮酸激酶 M2 型同工酶 （M2-PK） 呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（ OD 值），通过标准曲线计算样品中大鼠丙酮酸激酶 M2 型同工酶 （M2-PK） 浓度。

目的： 本试剂盒用于测定大鼠血清，血浆及相关液体样本中 丙酮酸激酶M2型同工酶（M2-PK） 的 含量。

服务承诺：

供货期：款到发货。
工作时间内免费的技术咨询和指导。 请
为客户提供来样检测服务，zui大限度实验结果的有效性（免费代测）。

保存条件及有效期：

试剂盒保存： 2-8 ℃ | 有效期： 6 个月

【大鼠丙酮酸激酶M2型同工酶（M2-PK）elisa试剂盒】 样本处理及要求 ：

1. 血清：室温血液自然凝固 10-20 分钟，离心 20 分钟左右（ 2000-3000 转 / 分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。

2. 血浆：应根据标本的要求选择 EDTA 或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合 10-20 分钟后，离心 20 分钟左右（ 2000-3000 转 / 分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。

3. 尿液：用无菌管收集，离心 20 分钟左右（ 2000-3000 转 / 分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。

4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心 20 分钟左右（ 2000-3000 转 / 分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用 PBS （ PH7.2-7.4 ）稀释细胞悬液，细胞浓度达到 100 万 /ml 左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心 20 分钟左右（ 2000-3000 转 / 分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

5. 组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的 PBS ， PH7.4 。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持 2 -8 ℃ 的温度。加入一定量的 PBS （ PH7.4 ），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心 20 分钟左右（ 2000-3000 转 / 分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。

6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可 将标本放于 -20 ℃ 保存，但 应避免反复冻融 .

7. 不能检测含NaN3的样品 ，因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（ HRP ）活性。

操作步骤

1. 标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔 10 孔，在*、第二孔中分别加标准品 100μl ，然后在*、第二孔中加标准品稀释液 50μl ，混匀；然后从*孔、第二孔中各取 100μl 分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液 50μl ，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取 50μl 弃掉，再各取 50μl 分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液 50ul ，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取 50μl 分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液 50μl ，混匀后从第七、第八孔中分别取 50μl 加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液 50μl ，混匀后从第九第十孔中各取 50μl 弃掉。（稀释后各孔加样量都为 50μl ，浓度分别为 1800ng/L ， 1200ng/L ， 600ng/L ， 300ng/L ， 150ng/L ）。

2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液 40μl ，然后再加待测样品 10μl （样品zui终稀释度为 5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3. 温育：用封板膜封板后置 37 ℃ 温育3 0 分钟。

4. 配液：将 30 （ 48T 的 20 倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 （ 48T 的 20 倍）倍稀释后备用。

5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此重复 5 次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶标试剂 50μl ，空白孔除外。

7. 温育：操作同 3 。

8. 洗涤：操作同 5 。

9. 显色：每孔先加入显色剂 A50μl ，再加入显色剂 B50μl ，轻轻震荡混匀， 37 ℃ 避光显色15分钟.

10. 终止：每孔加终止液 50μl ，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

11. 测定：以空白空调零， 450nm 波长依序测量各孔的吸光度（ OD 值）。 测定应在加终止液后 15 分钟以内进行。

【大鼠丙酮酸激酶M2型同工酶（M2-PK）elisa试剂盒】 注意事项：

1． 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

2． 浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

3． 各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间控制在 5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

4． 请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本 OD 值大于标准品孔*孔的 OD 值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（ n 倍）后再测定，计算时请zui后乘以总稀释倍数（ ×n×5 ）。

5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6． 底物请避光保存。

7． 严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准 .

8． 所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9． 本试剂不同批号组分不得混用。

10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。

试剂盒性能：

1. 样品线性回归与预期浓度相关系数 R 值为 0.95 以上。

2. 批内与批见应分别小于 9% 和 11%

检测范围：

0.2IU/L - 6IU/L

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