金葡菌特异性鉴别基因

    a．耐热核酸酶基因（heat stable nuelease，nuc）。耐热核酸酶（thermostablenuclease，TNase）是金葡菌的特异性酶，通过检测TNase酶活性以鉴定金葡菌通常有较好的专一性和准确性，但也存在一些非金葡菌株可检测到该酶活性的例子，其原因尚不清楚，可能是由于其可产生与TNase活性相似的酶。编码酶蛋白的nuc基因已全部定序。通过nuc基因的特异扩增来检测金葡菌已被证实具有非常好的特异性，避免了检测酶活时出现的假阳性现象，有很好的应用前景。扬州大学比较医学中心高正琴、邢华等通过扩增rlUC基因可以在4h内检测到zui低3pg DNA或5个金葡菌，并由此制备了特异性探针，检测灵敏度达lpg DNA，符合率为100％。

    b．staphopainA／B。saphopains是一种与葡萄球菌致病性相关的、外分泌型半*蛋白水解酶，包括蛋白水解酶A和蛋白水解酶B两种，分别由基因scpA和sspB编码。GolonkaE等通过PCR-RFLP技术对126株临床分离金葡菌进行了研究，发现所有菌株均检测到这两种基因的存在，且分别分为四型和六型。Southern杂交试验表明scpA和sspB基因在各菌株间高度保守，说明saphopains应该属于持家基因产物且具有重要的致病性能。

    c．血浆凝固酶（eoagulase）基因。大多数致病性葡萄球菌产生此酶，而非致病性菌一般不产生，因此，该酶是鉴别葡萄球菌有无致病性的重要指标。凝固酶有两种：一种是分泌至菌体外的蛋白质称为游离凝固酶（free coagulase）；另一种结合于菌体表面并不释放，称为结合凝固酶（boundcoagulase）或凝聚因子（clumping factor）。游离凝固酶采用试管法检测，结合凝固酶则以玻片法测定。凝固酶耐热，粗制品加热至100~C经30rain或高压灭菌后仍保持部分活性（staphylococcusbacteriaintroduce）；凝固酶基因曾被认为是鉴定金葡菌的特异性基因，但后来发现有少数金葡菌并不产生凝固酶，且一些凝固酶阴性菌也有很强的致病性，且因具有过高的多态性而更多地应用于金葡菌的分子分型技术。

    d．16SDNA、23SDNA及间隔序列23SRNA和168RNA分别为构成核糖体大、小亚基的重要组分，它们的基因即23SDNA和16SDNA在分类学的种间有高度的保守性，常可用来作为特异序列鉴定菌种属。J．丸Straub等以23S DNA为靶基因，通过PCR技术检测了肉类产品发酵剂及乳制品中的S．aulelgs，通过选择性前增菌过程，可在大量杂菌存在的背景下于12h内检测到10CFU浓度的目的菌，进而通过嵌套PCR技术可使检测极限下降一个数量级；翟俊辉等建立了以细菌16SDNA为对象的基因芯片技术，在4．5h内的纯细菌培养液中能检测到235个菌体的金葡菌；同时，一种通过对168rDNA扩增引物3’端单碱基错配来鉴定S．aUreUS的策略也具有很好的效果。rRNA杂交试验在检测金葡菌时表现出良好的特异性，但对临床样品的检测中缺乏很好的灵敏性而限制了它的应用。

    e．转录调控基因。D·Liu等报道了对S．aureus中编码转录调控因子的基因进行分析，发现了两个特异性片段Sa0836和Sa0856，并分别设计相应引物进行PCR，结果表明该序列对S．aureus具有明显的特异性，可检测所有待测的23株金葡菌，而其他类型葡萄球菌及常见菌均无此基因，表明该基因有很好的鉴别特异性。

    f．Sma I限制性酶切片段特异序列。一段44kb的Sma I序列被证实为金葡菌特异性序列。J．Stepan等将13株不同类型的金葡菌菌株基因组的EcoR工酶切片段与Sma工序列杂交，发现了在所有菌株中均存在一段2052bp的特异序列，通过设计引物，在待测的216株金葡菌中均特异性扩增出826bp片段，而其他阴性对照菌均无该特异片段。

    g．基因组特异性插入片段。Francis Martineau等在广泛分析了金葡菌基因组文库后得到一段442bp的、编码未知功能的特异性插入片段，通过PCR扩增在所有待测82株金葡菌中，均表现出特异性结果，而在其他类型葡萄球菌及非葡萄球菌致病菌中均未扩增，特异性强，操作简便，耗时短（仅1h）。