甘油醛3-磷酸脱氢酶ELISA试剂盒使用说明书

检测范围： 96T

0.6U/L – 16U/L

使用目的：

本试剂盒用于测定细菌样本中甘油醛 3- 磷酸脱氢酶 （GAPDH） 含量。

实验原理

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中 甘油醛 3- 磷酸脱氢酶 （GAPDH） 水平。用纯化的 甘油醛 3- 磷酸脱氢酶 （GAPDH） 抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入 甘油醛 3- 磷酸脱氢酶 （GAPDH） ， 再与 HRP 标记的 甘油醛 3- 磷酸脱氢酶 （GAPDH） 抗体结合，形成抗体 - 抗原 - 酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物 TMB 显色。 TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的 甘油醛 3- 磷酸脱氢酶 （GAPDH） 呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（ OD 值），通过标准曲线计算样品中 甘油醛 3- 磷酸脱氢酶 （GAPDH） 浓度。

试剂盒组成

1	30 倍浓缩洗涤液	20ml × 1 瓶	7	终止液	6ml × 1 瓶
2	酶标试剂	6ml × 1 瓶	8	标准品（ 32U/L ）	0.5ml × 1 瓶
3	酶标包被板	12 孔× 8 条	9	标准品稀释液	1.5ml × 1 瓶
4	样品稀释液	6ml × 1 瓶	10	说明书	1 份
5	显色剂 A 液	6ml × 1 瓶	11	封板膜	2 张
6	显色剂 B 液	6ml × 1/ 瓶	12	密封袋	1 个

标本要求

1 ．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可 将标本放于 -20 ℃ 保存，但 应避免反复冻融

2．不能检测含NaN3的样品 ，因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（ HRP ）活性。

操作步骤

1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

16U/L	5 号标准品	150μl 的原倍标准品加入 150μl 标准品稀释液
8U/L	4 号标准品	150μl 的 5 号标准品加入 150μl 标准品稀释液
4U/L	3 号标准品	150μl 的 4 号标准品加入 150μl 标准品稀释液
2U/L	2 号标准品	150μl 的 3 号标准品加入 150μl 标准品稀释液
1U/L	1 号标准品	150μl 的 2 号标准品加入 150μl 标准品稀释液

2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、 待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50 μl ， 待测样品孔中先加样品稀释液 40 μ l ，然后再加待测样品 10 μ l （样品zui终稀释度为 5 倍）。 加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3. 温育：用封板膜封板后置 37 ℃ 温育3 0 分钟。

4. 配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用

5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此重复 5 次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶标试剂 50μl ，空白孔除外。

7. 温育：操作同 3 。

8. 洗涤：操作同 5 。

9. 显色：每孔先加入显色剂 A50μl ，再加入显色剂 B50μl ，轻轻震荡混匀， 37 ℃ 避光显色15分钟.

10. 终止：每孔加终止液 50μl ，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

11. 测定：以空白空调零， 450nm 波长依序测量各孔的吸光度（ OD 值）。 测定应在加终止液后 15 分钟以内进行。

操作程序总结：

1.准备试剂，样品和标准品

2.加入准备好的样品和标准品，37℃反应30分钟

3.洗板5次，加入酶标试剂，37℃反应30分钟

4.洗板5次，加入显色液A、B，37℃反应10分钟

5.加入终止液

6.15分钟之内度OD值

7.计算

计算

以标准物的浓度为横坐标， OD 值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的 OD 值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与 OD 值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的 OD 值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。

注意事项

1 ．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

2 ．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

3 ．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间控制在 5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

4． 请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本 OD 值大于标准品孔*孔的 OD 值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（ n 倍）后再测定，计算时请zui后乘以总稀释倍数（ ×n×5 ）。

5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6 ．底物请避光保存。

7 ．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准 .

8 ．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9 ．本试剂不同批号组分不得混用。

10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。

保存条件及有效期

1 ．试剂盒保存： ； 2 -8 ℃ 。

2 ．有效期： 6 个月