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小鼠*ELISA检测试剂盒说明书

2011年06月24日 13:38:01人气:1654来源:上海恒远生物科技有限公司

        小鼠*ELISA检测试剂盒说明书

本试剂仅供研究使用
小鼠*ELISA检测试剂盒 试验原理
        HYD 试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验( ELISA . 已知 HYD 浓度的标准品、未知浓度的样品 加入微孔酶标板内进行检测。先将 HYD 和*标记的抗体同时温育。洗涤后,加入亲和素标记过的 HRP 。再经过温育和洗涤,去除未结合的酶结合物,然后加入底物 A B ,和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中 HYD 的浓度呈比例关系。
试剂盒内容及其配制
试剂盒成份
96 孔配置
48 孔配置
96/48 人份酶标板
1 块板( 96T
半块板( 48T
塑料膜板盖
1
半块
标准品: 240ng/ml
1 瓶( 1.0ml
1 瓶( 0.5ml
空白对照
1 瓶( 1.0ml
1 瓶( 0.5ml
标准品稀释缓冲液
1 瓶( 8.0ml
1 瓶( 4.0ml
*标记的抗 HYD 抗体
1 瓶( 8.0ml
1 瓶( 4.0ml
亲和链酶素 -HRP
1 瓶( 12ml
1 瓶( 5ml
洗涤缓冲液
1 瓶( 20ml
1 瓶( 10ml
底物 A
1 瓶( 6.0ml
1 瓶( 3.0ml
底物 B
1 瓶( 6.0ml
1 瓶( 3.0ml
终止液
1 瓶( 6.0ml
1 瓶( 3.0ml
自备材料
1. 蒸馏水。
2. 加样器: 5ul 10ul 50ul 100ul 200ul 500ul 1000ul
3. 振荡器及磁力搅拌器等。
样品收集、处理及保存方法
1、 血清 ……操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原
和内毒素的试管。收集血液后,1000 × g 离心 10 分钟将血红
细胞迅速小心地分离。
2 血浆 ……EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000 × g 离心 30 分钟去除颗粒。
3 细胞上清液 ……1000 × g 离心 10 分钟去除颗粒和聚合物。
4 组织匀浆 ……将组织加入适量生理盐水捣碎。1000 × g 离心 10 分钟,取上清液。
 5 保存 ……如果样品不立即使用,应将其分成小部分-70℃保存,避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒,检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
小鼠*ELISA检测试剂盒 操作注意事项
试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。
实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。
不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物 A B 液时,避免使用带金属部分的加样器。
使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
底物 A 应挥发,避免长时间打开盖子。底物 B 对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取 OD 值。
加入试剂的顺序应一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样。
按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
安全性
1. 避免直接接触终止液和底物 A B ,一旦接触到这些液体,请尽快用水冲洗。
2. 实难中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。
3. 不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。
试剂的准备
1. 标准品:标准品的系列稀释应在实验时准备,不能储存。稀释前将标准品振荡混匀。稀释比例按下表中进行:
240
ng/ml
(6 号标准品)
原倍浓度不用稀释直接加入50ul
120
ng/ml
(5 号标准品)
100ul 的原倍标准品加入100ul 的标准品稀释液
60
ng/ml
(4 号标准品)
100ul 的5 号标准品加入100ul 的标准品稀释液
30
ng/ml
(3 号标准品)
100ul 的4 号标准品加入100ul 的标准品稀释液
15
ng/ml
(2 号标准品)
100ul 的3 号标准品加入100ul 的标准品稀释液
7.5
ng/ml
(1 号标准品)
100ul 的2 号标准品加入100ul 的标准品稀释液
0
ng/ml
(空白对照)
原倍浓度不用稀释直接加入50ul
2. 洗涤缓冲液( 50× )的稀释:蒸馏水 50 倍稀释。
试剂盒性能
1. 灵敏度:zui小的检测浓度小于 1 号标准品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数 R 值为 0.990
2. 特异性:不与其它细胞因子反应。
3. 重复性:板内、板间变异系数均小于 10%
小鼠*ELISA检测试剂盒 操作步骤
1. 使用前,将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫,以免加样时加入大量的气泡,产生加样上的误差。
2. 根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定,能使用复孔的尽量做复孔。
3. 加入稀释好后的标准品 50 ul 于反应孔、加入待测样品 50 ul 于反应孔内。立即加入 50 ul 的*标记的抗体。盖上膜板,轻轻振荡混匀, 37 ℃温育45分钟。
4. 甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作4次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。
5. 每孔加入100ul的亲和链酶素-HRP,轻轻振荡混匀,37℃温育30分钟。
6. 甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作4次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。
7. 每孔加入底物A、B各50ul,轻轻振荡混匀,37℃温育5分钟。避免光照。
8. 取出酶标板,迅速加入 50 ul 终止液,加入终止液后应立即测定结果。
9. 450 nm 波长处测定各孔的 OD 值。
结 果 判 断 与 分 析
1、 仪器值:于波长 450nm 的酶标仪上读取各孔的 OD
2、 以吸光度 OD 值为纵坐标( Y ),相应的 HYD 标准品浓度为横坐标( X ),做得相应的曲线,样品的 HYD 含量可根据其 OD 值由标准曲线换算出相应的浓度,再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与 OD 值计算出标准曲线的回归方程式,将样品的 OD 值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。
3、 检测值范围: 0-240ng/ml
4、 敏感度: 0.1ng/ml


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