上海都宜生物科技有限公司作者
293-T细胞培养
应注意以下几个方面:
1.用1640加10%胎牛血清,有的种系用DMEM.血清要求质量较高,在普通血清中细胞生长不太好。1640用双蒸水溶解,按说明加入*。
2.培养液中应加入HEPES,起缓冲pH值的作用,否则会影响细胞状态。如果用20%的HEPES,每次配培养液时每200ml培养液可加入5ml.加入HEPES后1640培养液颜色略呈橘黄色而非暗红色。
3.消化所用*可选择0.125%浓度,且不要消化时间太长。也有研究者认为不用*,直接吹打使细胞脱壁,但使用*效果较好。消化时在镜下观察到细胞形态稍有变化即可,不要等形态明显变化后再停止。可以不用加血清终止消化,只要将*倒出来,加上培养液吹打即可。
4.传代密度不宜过高也不易过低,一般1瓶传3瓶可能比较合适。
5.培养液应该适当偏酸性,在7.0-7.2之间比较好。一般加上HEPES后,pH值是不用调的。
6.细胞代数越高生长越快,同时性状和原代差别也更大。一般2-3天传代一次比较合适。
7.传代时细胞密度在80%左右比较好,如果超过90%融合再传会影响细胞状态。
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