2016 02-22

基因克隆的载体

基因克隆的本质是使目的基因在特定的条件下得到扩增和表达，而目的基因本身无法进行复制和表达、不易进入受体细胞、不能稳定维持，所以就必须借助于“载体”及其“寄主细胞”来实现。作为基因克隆的载体必须具备以下...

2016 02-19

限制性核酸内切酶及其应用

限制性核酸内切酶及其应用（一）限制性核酸内切酶的发现当λ(k)噬菌体侵染E.coliB时，由于其DNA中有EcoB核酸酶特异识别的碱基序列，被降解掉。而E.coliB的DNA中虽然也存在这种特异序列，...

2016 02-17

轮转式切片机石蜡切片法

组织经石蜡包埋后制成的蜡块，用切片机制成切片的过程为石蜡切片法。石蜡切片法现使用的切片机有*、轮转式切片机两种。ELISA试剂盒轮转式切片机石蜡切片法1．切片前的准备：清洗过的载玻片、毛笔、铅笔、盛有...

2016 02-15

中枢免疫器官与外周免疫器官

根据免疫器官在免疫细胞发育成熟过程中所起的作用不同，可将它分为中枢免疫器官和外周免疫器官，前者是T细胞和B细胞发生、分化、成熟的场所，后者是T细胞和B细胞定居、增殖和接受抗原刺激产生特异性免疫应答的场...

2016 02-03

几种常用的亲和纯化技术

串联亲和纯化属于亲和纯化的一种（比较了几种常用的亲和纯化技术的优缺点和常见应用领域）。zui常用的亲和纯化技术是免疫沉淀法，通过抗体-抗原的亲和作用，“捕捉”到相互作用的蛋白。但是普通的免疫沉淀法由于...

2016 02-01

宿主感染的细菌

细菌侵入宿主机体生长繁殖并释放毒性物质引起不同程度的病理过程，称为细菌的感染（bacterialinfection）或传染。能使宿主感染的细菌为致病菌或病原菌（pathogenicbacte-rium...

2016 01-29

造血干细胞的检测方法

1.脾克隆形成法该方法是人类认识HSCzui早的方法，主要用于评估小鼠的HSC:将小鼠的骨髓或脾细胞注射到经放射线照射过的小鼠体内，通过观察CFU-S的数量和种类来推知HSC。这种方法不能用于测量人类...

2016 01-27

酵母人工染色体载体

酵母人工染色体载体酵母人工染色体载体（ＹＡＣ）是由ＣＥＮ载体发展而来的。它的主要组成如下：（１）着丝粒；（２）两个端粒：存在于染色体的末端，使染色体正确地结束复制，防止染色体被外切酶切割；（３）复制起...

2016 01-25

培养基成分划分以及物理状态划分

1．根据培养基成分划分(1)天然培养基天然培养基指利用动、植物或微生物体或其提取物制成的培养基，其成分复杂且难以确定。常用的天然有机物有牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、麦芽汁、玉米粉、血清、稻草浸汁、羽毛浸汁...

2016 01-22

多肽链的延长

核糖体是多肽链合成的主要场所，在大亚基和小亚基的交界面形成了3个tRNA结合位点，分别为A、P和E位点。A位点是氨基酰tRNA的结合位点，P位点是肽基酰tRNA的结合位点，E位点是脱氨基酸后的空载tR...

2016 01-20

烈性噬菌体与噬菌体的分离及效价测定

噬菌体是一种专门寄生在微生物体内的病毒，它的头、尾外部都有由蛋白质组成的外壳(头膜和尾鞘)，头的内部含有DNA。噬菌体的生活过程可分为对宿主的吸附、侵入、增殖、成熟和裂解五个阶段。噬菌体分为烈性噬菌体...

2016 01-18

骨髓细胞分离培养

骨髓作为主要的造血场所，可进行体外培养。在无菌条件下，把骨髓细胞分离出来，置于培养系统中，在合适的环境中，提供营养物质，使其继续生存或生长。通过培养骨髓，可见到造血干细胞不同分化阶段时各种血细胞的前驱...

2016 01-15

本底及假阳性产生的原因分析

本底及假阳性产生的原因分析1.基因工程抗原与合成肽抗原的区别1.1基因工程抗原是抗原基因在质粒载体中原核或真核表达的蛋白质抗原，多以大肠杆菌或酵母菌为表达系统。该类抗原与合成肽相比具有以下特点：a.分...

2016 01-13

吸附柱层析法

层析法是一种物理分离方法。柱层析法是层析方法中的一个类型，分为吸附柱层析法和分配柱层析法。ELISA试剂盒吸附柱层析法是分离、纯化和鉴定有机物的重要方法。它是根据混合物中各组分的分子结构和性质（极性）...

2016 01-11

以酿酒酵母为宿主的常见载体

在一些情况下，例如需要对真核微生物的代谢途径进行修饰，或者需要表达的真核生物蛋白需要合适的翻译后修饰才具有生物活性时，就需要采用真核微生物表达载体。真核细胞基因表达调控要比原核细胞基因复杂得多，用于真...

2016 01-08

细胞悬浮培养类型和方法

细胞悬浮培养是将细胞悬浮在液体培养基中进行的无菌培养。培养类型和方法(一)成批培养将细胞培养在一定容积的密闭容器中进行培养。它是进行细胞生长和细胞分裂的生理生化研究常用的培养方法。1．成批培养的特点培...

2016 01-06

荧光标记原位杂交法

荧光标记原位杂交法(fluorescenceinsituhykbridizatlon，FISH)是近年发展起来的非放射性标记新技术。FISH可检测单拷贝基因、表达mRJA等；其有无毒性、快速、分辨率高...

2016 01-04

同位素法

一、同位素法51Cr释放法(以CTL为例)51Cr释放法是用铬酸钠(Na51CrO4)标记的靶细胞与致敏淋巴细胞一起培养，靶细胞被CTL杀灭后，51Cr即释放到培养液中，测定释放到培养液中51Cr的脉...

2015 12-31

胰岛素对离体犊牛小肠吸收功能影响的实验

(一)试验原理新生哺乳动物胃肠道的生长发育非常迅速，这与初乳的摄入有关，初乳中含大量多肽类生长因子如胰岛素等。本实验通过体外犊牛小肠上皮细胞培养法，用细胞增殖率和葡萄糖吸收率作为细胞生长发育及功能成熟...

2015 12-28

染色体畸变的试验方法

染色体畸变是基因突变的一种形式，通常后果比较严重。可用外周血淋巴细胞，或人和哺乳动物体细胞系作为材料进行检测，常用的体细胞系有中国地鼠卵巢细胞(CHO)，中国地鼠肺成纤维细胞(V79和CHL)，人胚肺...